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目的:类风湿性关节炎作为一种骨关节相关的自身免疫性疾病,反复发作可导致关节内软骨和骨的破坏,骨骼肌萎缩,关节功能丧失,极易致残。目前其发病机制尚不明确。由于Th17细胞能够介导前炎症反应,抑制软骨基质的形成,诱导成骨细胞表达破骨细胞分化因子促进骨侵蚀;因而通过抑制Th17细胞的分化,可促进新的Treg细胞的生成,诱导免疫耐受,重新建立体内免疫稳态。本实验从Th17细胞因子的角度研究炎性细胞因子对破骨细胞功能的调节,分析其细胞损伤过程中细胞因子—破骨细胞的信号联系,进一步观察细胞因子阻断性抗体的作用,明确Th17细胞在细胞损伤作用机制。通过建立胶原诱导关节炎(CIA)小鼠模型,探讨不同浓度的IL-17A中和性抗体对CIA小鼠血清中炎症细胞因子表达。进一步观察细胞因子阻断性抗体的作用,明确Th17细胞在细胞因子—破骨细胞损伤作用机制。 方法:将48只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为4组:A(空白对照)组、B(CIA+生理盐水)组、C(CIA+高浓度)组、D(CIA+低浓度)组,每组12只;将酸可溶性鸡Ⅱ型胶原蛋白(chicken collagenⅡ,CCⅡ)溶于0.5 mol/L的醋酸溶液中,使用匀浆器充分乳化于4℃搅拌过夜,使CCⅡ充分溶解,然后加入等体积的氟氏完全佐剂(CFA)将其充分混匀乳化配成浓度为2.0mg/mL的乳剂,按每只小鼠0.1mL乳剂于尾部皮内多点免疫,初次免疫2周后以同样方法加强免疫,诱导CIA小鼠模型出现后在小鼠腹腔注射细胞因子中和性抗体或生理盐水,观察2周并记录小鼠关节及关节外表现,检测血清TNF-a、IL-17、IL-6表达水平。采用SPSS18.0统计软件进行处理,计量资料用均数±标准差((x)±s)表示;采用One-wayANOVA分析和t检验;P<0.05表示差异有统计学意义。 结果:C57BL/6雄性小鼠给药48小时后尾部注射部位出现多个炎性小溃疡,红肿明显,逐渐加重并破溃,破溃处结痂,而溃疡愈合后脱落。初次免疫21天后开始发病,出现后足关节红肿,肤温升高,毛发失去色泽,神志倦怠,然后蔓延到踝关节和前足,逐渐加重,表现为多发性、对称性关节肿胀变红,部分小鼠关节强直、畸形,活动受限。A组随饲养时间延长,体重逐渐加重。模型组体重增加明显小于正常组。C、D与B比较TNF-a、IL-17、IL-6表达水平显著降低,并且IL-17A中和性抗体高浓度组较低浓度组血清中炎症细胞因子表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:通过CIA小鼠腹腔内注射IL-17A中和抗体,结果发现IL-17A中和抗体治疗组小鼠的足肿胀程度及功能障碍减轻,并且关节炎平均指数评分改善,另外关节肿胀程度与足垫厚度呈正相关性,与小鼠体重变化呈负相关性。IL-17A中和性抗体可显著降低CIA小鼠模型血清中炎症细胞因子TNF-a、IL-17、IL-6表达水平,且以高浓度组较低浓度组改善骨关节功能更显著,其作用机制是通过调节Th17细胞参与介导的细胞因子损伤免疫机制,抑制炎症细胞因子表达来实现。