四季秋海棠株形优美，花色娇艳，广泛用于园林绿化及庭院装饰，是著名秋海棠属观赏花卉中栽培最广泛的一种。四季秋海棠的繁殖通常采用播种、扦插。现代植物组织培养技术生产周期短，繁殖系数高。因此四季秋海棠组织培养的研究与应用有着重要意义和广阔的前景。四季秋海棠喜湿润环境，不耐盐碱与干旱。通过基因工程方法将耐盐相关基因转入四季秋海棠，可为秋海棠耐盐抗旱新品种的培育开辟新途径。 本课题以四季秋海棠为材料，进行了以下实验。 (一)四季秋海棠无菌苗的获得 以四季秋海棠叶片为材料，用打孔器将其打孔成直径8mm的叶盘。接种到培养基A3(MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L)上。当不定芽长到l～2cm时，将其切下，转入培养基B(MS+6-BA 0.4.m0g/L+NAA 0.1mg/L)进行增殖培养。当小苗长至3cm左右，转到培养基C1(不含激素的MS基本培养基)中进行生根培养。生根率达100％。以四季秋海棠无菌苗作为下一步研究的材料。 (二)几种植物激素对四季秋海棠叶盘分化的影响 选取三种常用的植物激素：细胞分裂素6-BA、生长素激素NAA和2,4-D。每种激素取0，0.2，0.5，1.0mg/L四种浓度。并选取5.6，5.8，6.0和6.2四个pH值。以MS为基本培养基，设计四季秋海棠叶盘诱导培养基的四因素四水平的正交实验。四季秋海棠叶盘接种一个月后，统计四季秋海棠的叶盘膨大率、愈伤组织形成率和不定芽诱导率，并进行方差分析。实验结果表明，细胞分裂素6-BA是诱导四季秋海棠叶盘脱分化与再分化的关键因素，其最低有效浓度为0.5mg/I。生长素激素NAA及2,4-D不能诱导四季秋海棠叶盘分化。其中2,4-D诱导愈伤组织的形成而抑制不定芽的生成。pH值在5.6～6.2范围之间的变化对四季秋海棠叶盘分化的影响不大。 根据正交实验的结果，设计5种6-BA与NAA不同浓度的培养基(A1～A5)进行不定芽诱导实验。实验结果显示，培养基A1～A3对四季海棠的不定芽诱导率都达到90％以上。确定激素含量较低的A3培养基为四季秋海棠的不定芽诱导培养基。 (三)四季秋海棠转基因实验的影响因素的研究 接种四季秋海棠叶盘于含有不同浓度卡那霉素(Kan)的诱导培养基A3上。接种4周后统计叶盘的膨大率及不定芽诱导率，由此确定适宜的Kan选择浓度为30mg/L。 头孢霉素(Cef)对农杆菌的抑菌实验表明，Cef浓度大于200mg/L时即可抑制农杆菌的生长。此外，将四季秋海棠叶盘接种于含有不同浓度Cef的诱导培养基A3上。接种4周后统计叶盘的膨大率及不定芽诱导率，从而确定适宜的Cef抑菌浓度为200mg/L。 农杆菌转化植物组织主要涉及外植体的预培养时间、农杆菌侵染液的浓度、侵染时间及共培养时间等四个因素。设计上述四个因子的正交实验。统计叶盘膨大率和不定芽诱导率，并进行方差分析。 其结果是：(1)依方差分析中各因素F值大小，在转化实验中，叶盘预培养时间对不定芽诱导率影响最大，达到比较显著水平。其次因素是共培养时间。再次是侵染时间。而农杆菌菌液的浓度对不定芽诱导率的影响较小。(2)初步确定了适宜的转化条件为：叶盘预培养3天，农杆菌菌液浓度为0D<,600>)=0.25，农杆菌侵染时间为9min，共培养时间为4天。 (四)大豆耐盐基因Sali3-2转化四季秋海棠 采用农杆菌叶盘法用大豆耐盐相关基因Sali3-2转化四季秋海棠。经抗生素筛选，得到2株候选的转基因植株。候选的植株经PCR检测，可扩增出特异的抗卡那霉素和Sali3-2基因的特异条带。表明大豆Sali3-2基因已被整合入四季秋海棠基因组。