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脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)是临床上常见病多发病,尤其是严重的脊髓损伤,致残率很高,严重危及人类的健康,对个人和社会都造成了极大的损失。近年来,大量实验证明嗅鞘细胞(OECS)移植能促进脊髓损伤神经纤维的再生。OECS促进脊髓再生的作用是通过在损伤段为再生神经纤维形成髓鞘和分泌一些促进脊髓损伤再生的因子而实现的。嗅鞘细胞移植将成为解决脊髓损伤这一临床世纪难题的重要方法之一。目的:在差速贴壁+Thy1.1抗体及补体方法基础上,用无血清培养液换液纯化培养条件下OECS的生长,并观察其移植后在体内存活情况和对脊髓横断伤的修复作用。方法:1.细胞培养:用Sprague-Dawley大鼠嗅球(OB)做OECS原代培养,然后利用差速贴壁+Thy1.1抗体及补体和无血清培养液换液方法做纯化培养。倒置相差显微镜下观察OECs的形态变化特点及生长情况,利用中枢神经系统中仅有OECS细胞表现为神经胶质元纤维酸性蛋白(GFAP)和低亲和力神经生长因子受体(P75)免疫染色双阳性的特性,鉴定OECS。2.动物实验:四月龄Sprague-Dawley大鼠,体重250g左右。显露T9段脊髓,在中间横行完全切断脊髓。A组(20只)在损伤远近端注射的OECS,B组(20只)在相同位置注射DMEM培养液,C组(10只)单纯做T9节段的椎板减压。术后观察动物脊髓功能恢复情况,每两周测定一次后肢运动功能(BBB评分法),共12周。术后三个月取损伤段及其临近脊髓标本,做HE染色、嗜银染色、抗NF和P75免疫组化染色。利用P75免疫组化染色来观察OECS在体内存活情况。结果:1.差速贴壁+Thy1.1抗体及补体和无血清纯化培养方法,OECS增殖迅速,是一种效率较高的培养方法。2.手术后4周开始有运动功能恢复,在各个时间段BBB运动功能得分A组均高于B组。比较12周时两组BBB得分,差异明显(P<0.001)。3.A、B组都有神经纤维进入损伤区,排列紊乱,数量不等。在损伤近端,神经纤维数量A组多于B组(P<0.001),但都少于相应节段的C组(P<0.001)。4.通过显微镜能观察到经过P75免疫组化的OECS存在于脊髓损伤段周围,最远可到距离损伤区边缘1.0cm处。5.统计学分析表明,脊髓损伤再生神经纤维的数量与运动功能恢复之间存在正相关(r=0.981)。结论:1.差速贴壁+Thy1.1抗体及补体和无血清纯化的培养方法是一种能使细胞增殖迅速,可获得较高纯度OECS的培养方法2. OECS植入体内可以长时间存活,并有自我迁移能力。3.OECS移植具有明显促进脊髓横断伤神经纤维再生和功能恢复的作用。