论文部分内容阅读
目的:本研究采用β-淀粉样蛋白（Aβ25-35）致鼠肾上腺嗜铬瘤细胞PC12(Rat pheochromoeytoma)损伤为AD模型，采用细胞形态学观察及细胞活力检测，应用免疫荧光和免疫印迹技术检测HMGB1在细胞的表达情况，探讨HMGB1在AD病理过程中的重要性和干预价值，为姜黄素进一步用于AD患者提供理论基础和实验依据。
方法:取对数期生长的PC12细胞分为5组:正常细胞组（A组）、Aβ25-35模型组（B组）、姜黄素Cur+Aβ25-35治疗组（C组），rHMG1+Aβ25-35损伤组（D组），溶剂对照组DMSO+Aβ25-35（E组）。(1)A组不做任何处理;(2)B组加入终浓度为20μmol/L的Aβ25-35;(β)C组同时加入终浓度为20μmol/L的Aβ25-35和终浓度为1μmol/L的Cur共同孵育（姜黄素被溶解于1μl/ml DMSO）。(4)D组同时加入500ng/ml的HMGB1+20μmol/L的Aβ25-35.(5)E组同时加入终浓度为20μmol/L的Aβ25-35和1μl/ml的DMSO，孵育24小时后进行细胞形态学观察，细胞免疫荧光定性和Westem blot法检测HMGB1等蛋白表达情况。
结果:
1、姜黄素可以减轻AD细胞毒性。与A组相比，B、D、E组细胞活力下降明显;与B组相比，C组细胞抑制率降低，B组与D、E组相比，差异无统计学意义。
2、姜黄素能够降低HMGB1的表达。Western blot结果显示，与A组相比，B、D、E组细胞内HMGB1表达升高;与B组相比，C组的HMGB1的表达下降，B组与D、E组相比，差异无统计学意义。
3、姜黄素可能抑制HMGB1的胞外释放。免疫荧光定性结果显示，与A组相比，B组存在大量的HMGB1胞核外释放情况;和B组相比，C组HMGB1的胞外释放情况减少。
结论:Aβ25-35引起PC12细胞毒性;姜黄素可减轻Aβ25-35引起的PC12细胞毒性;姜黄素可减少Aβ25-35引起的PC12细胞中HMGB1的表达，并抑制HMGB1的胞外释放。