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研究背景嗅鞘细胞是位于嗅粘膜和嗅球内的一种特殊的神经胶质细胞,因其能引导嗅觉神经元的轴突延伸,穿过筛板,并与位于中枢神经系统内的神经元建立突触连接,而被认为是最有应用前景的用于治疗中枢神经系统损伤的移植供体细胞。目前用于移植研究的嗅鞘细胞主要来源于嗅球的体外培养及纯化。由于嗅球材料来源困难,嗅鞘细胞的临床实际应用受到很大程度的限制。此外,体外培养嗅鞘细胞时,培养液中所添加的胎牛血清,为异种蛋白,且可能含有病原体,对嗅鞘细胞人体内移植带来潜在的危害。
第一部分成人嗅粘膜嗅鞘细胞的体外培养及形态学研究目的探讨成人嗅粘膜嗅鞘细胞的体外培养及纯化的方法,并对所培养的细胞进行形态学研究。方法取自愿者(成人)的嗅粘膜,在体外混合培养嗅粘膜细胞,跟踪观察细胞的贴壁、生长及分化过程,并用神经生长因子受体(NGFRp75)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及S-100抗体作免疫细胞化学和免疫荧光染色,对阳性细胞进行形态学鉴定。结果成人嗅粘膜细胞体外混合培养,经过多次传代培养后,嗅鞘细胞逐渐成为优势细胞。成熟的嗅鞘细胞呈长梭形,突起细长,相邻细胞突起的延伸方向较为一致,并出现特征性的首尾相接现象。结论成人嗅粘膜嗅鞘细胞体外培养可获得较高产量的嗅鞘细胞,该细胞可作为自体细胞移植治疗中枢神经系统损伤的候选细胞。
第二部分人血清及神经生长因子对成人嗅粘膜嗅鞘细胞体外增殖的影响目的观察人血清及神经生长因子对成人嗅粘膜嗅鞘细胞体外增殖的影响。方法取对数生长期的嗅鞘细胞,分为6组,分别用DFl2培养液、10ng/ml NGF+DFl 2培养液、含10%FBS的DFl2培养液、10ng/mlNGF+含10%FBS的DFl2培养液、含10%人血清的DFl2培养液和10ng/mlNGF+含lO%人血清的DFl2培养液培养,采用MTT法观察上述各种培养条件下嗅鞘细胞增殖能力。结果含血清培养液的四组与DFl2培养液组之间的吸光度有显著统计学意义(P<0.01);胎牛血清组和人血清组之间的吸光度无统计学意义(P>0.05);加入与不加入NGF的培养液组之间的吸光度无统计学意义(P>0.05)。结论人嗅鞘细胞的体外培养对血清具有依赖性,人自体血清可替代胎牛血清用于嗅鞘细胞的体外培养、扩增。本研究结果为人嗅鞘细胞的自体取材、自体血清培养并用于自体移植治疗脊髓损伤提供了研究基础。