目的制备PVA/ι-CA复合材料并对性能进行表征,通过ATDC-5与复合支架材料的共培养,观察ATDC-5在复合支架材料上的生物学行为。皮下植入复合支架材料,评价组织的局部反应,包括早期的炎症反应和后期的血管化,进而评价该复合材料的组织相容性及其用于构建组织工程软骨的可行性。方法1制备含不同卡拉胶(质量分数0%、5%、10%、20%、30%)的PVA/ι-CA复合膜材料和复合支架材料,并对支架材料的性能进行表征。2将HU-VEC与复合膜材料共培养,通过细胞黏附实验、细胞增殖实验、SEM观察细胞在材料上的生长及增殖状况,筛选出最优配比的复合支架材料做生物实验。3将ATDC-5接种于优选支架材料,复合培养7、14、21天,通过石蜡切片常规染色、扫描电镜、观察ATDC-5在支架材料上的黏附、增殖情况,通过甲苯胺蓝染色法、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原蛋白的表达。4将优选复合支架材料植入SD大鼠皮下,术后1、2、3、4周,通过石蜡切片常规HE染色、Masson染色、VG染色、Fli-1免疫组化及免疫荧光染色观察,评价该复合支架材料的组织相容性、血管化能力及体内降解情况。结果1制备的PVA/ι-CA复合支架材料呈三维多孔状,具有良好的孔隙率。2HU-VEC与复合膜材料共培养5天后扫描电镜观察结果示:随着卡拉胶含量的增加,膜材料上的细胞数量逐渐增加,故优选卡拉胶质量分数为30%的复合支架材料进一步实验。3 ATDC-5与支架材料的复合物HE染色结果示:ATDC-5在支架材料上贴附生长良好,呈多角形,形态饱满;Ⅱ型胶原免疫组织化学及免疫荧光结果示:ATDC-5在支架材料上表达Ⅱ型胶原,证明支架材料上的ATDC-5仍保持软骨细胞的特性。4皮下植入支架材料实验结果示:1周时无组织坏死现象,可见细胞向材料边缘长入,并有少量的中性粒细胞、淋巴细胞散在分布,未见明显的巨噬细胞、多核巨细胞;2周时细胞逐渐长入材料深部,炎性细胞减少;3周时部分材料内部充满成纤维细胞、毛细血管,并可见多核巨细胞及淋巴细胞;4周时材料的孔结构完整,但间隙出现纤细的胶原纤维,排列较规律,血管较前减少。结论1采用冷冻-解冻循环技术制备出了三维多孔聚乙烯醇-卡拉胶复合支架材料。2细胞实验表明ATDC-5能在聚乙烯醇-卡拉胶复合支架材料的表面和内部黏附、生长及增殖,证实本支架材料无明显细胞毒性,具有良好的细胞相容性。3皮下包埋实验表明聚乙烯醇-卡拉胶复合支架材料在体内引起的炎症反应轻微,后期血管化良好,材料降解吸收缓慢,具有良好的生物相容性。