【摘 要】
:
牛结核是由牛分枝杆菌引起的人类和动物的人畜共患传染病,OIE将牛结核病分为B类人畜共患疾病在中国为II类人畜共患疾病。牛结核病每年给畜牧业带来的经济损失不可估量,不仅如此,牛结核病给人类的安全带来重大的隐患,因此对于牛结核病的防控至关重要,本研究希望通过探寻作为快速诊断的靶基因以及抗原蛋白,以免疫酶联吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR技术为基础,建立针对牛结核病的诊断方法,为结核病的防控提
论文部分内容阅读
牛结核是由牛分枝杆菌引起的人类和动物的人畜共患传染病,OIE将牛结核病分为B类人畜共患疾病在中国为II类人畜共患疾病。牛结核病每年给畜牧业带来的经济损失不可估量,不仅如此,牛结核病给人类的安全带来重大的隐患,因此对于牛结核病的防控至关重要,本研究希望通过探寻作为快速诊断的靶基因以及抗原蛋白,以免疫酶联吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR技术为基础,建立针对牛结核病的诊断方法,为结核病的防控提供新的技术手段进行以下研究:(1)通过生物信息学分析的手段,对本试验室前期研究的16种结核特异性蛋白进行分析,通过理化特性、不稳定性指数、亲水性、蛋白质二级结构、跨膜域以及B细胞表位的分布预测为后续试验提供理论数据支持;将16株表达菌经表达纯化,经蛋白免疫印迹试验(Western-Blotting)验证均能与牛结核病阳性的牛血清进行反应,具有良好的反应源性;最终用爱德士牛结核病抗体检测试剂盒对本试验涉及的所有蛋白进行初步筛选,结果显示MPT70和MPT83在牛结核病的间接ELISA检测中具备优秀的诊断效能,可以作为诊断抗原进一步研究。(2)以MPT70蛋白、MPT83蛋白、MPT70-83融合蛋白、MPT70预测的抗原表位肽(M1)、MPT83预测的抗原表位肽(M2)分别为包被抗原建立间接ELISA检测方法,通过方阵滴定,确定其最佳包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度以及血清、二抗和显色的最佳反应时间,在各种最佳反应条件下对牛结核阳性的血清和牛结核阴性的血清进行检测,确定其阳性符合率以及阴性符合率。结果显示M1和MPT70的阴阳性符合率以及M2和MPT83的阴阳性符合率相当,可以以抗原多肽代替全蛋白作为诊断抗原。(3)建立一种基于Mpt83基因的实时荧光定量pcr的结核分枝杆菌核酸检测的方法,根据Mpt83基因设计一对特异性引物,以培养的H37RV标准株为模版扩增目的基因并连接T载体,构建标准重组质粒以检测所建方法的有效性。经反应条件的优化建立SYBR Green I实时荧光定量检测方法,结果显示所建立的方法线性关系良好,融解曲线波峰单一,具有很强的特异性与常见致病菌无交叉反应,最低检出下限为10copies/reaction,是常规PCR的100倍,对牛乳模拟标本的检测可达到10 CFU/10m L,可用于病菌的检测及定量分析。本试验通过生物信息学分析以及酶联免疫吸附试验对16种结核特异性蛋白进行初步的筛选,筛选出MPT70、MPT83两种对于牛结核病血清学诊断最具价值的抗原蛋白;分别以MPT70和MPT83两种蛋白和MPT70预测的抗原表位肽(M1)、MPT83预测的抗原表位肽(M2)以及MPT70-83融合蛋白建立间接ELISA检测方法,通过临床样本检测的结果显示两种蛋白的优势抗原表位段均能代替两种蛋白的全蛋白作为诊断抗原;以M PT83为靶基因的建立荧光定量PCR的检测方法,经检测所建立的方法具有良好的特异性,其检出下限可达10copies/reaction,对牛乳模拟标本的检测可达到10 CFU/10m L,可用于定量分析。为牛结核病的快速诊断提供一种新的技术方法。
其他文献
研究平养场不同垫料对种鸡生产性能的影响,以通过垫料提高种鸡的生产性能。在山东某种鸡场,将10栋鸡舍分成2组,每组5个鸡舍,每个鸡舍种母鸡6 000只,种公鸡600只,种鸡品种为ROSS父母代,批次为20150317,其中第1组5个鸡舍全部铺设板条而不铺稻草垫料,第2组5个鸡舍4周铺设板条,中间为稻壳垫料,在鸡舍温度、湿度、光照、饲料、饮水以及免疫均相同的条件下,比较两组鸡舍2560周龄内种鸡产蛋率
生产中肉种公鸡管理不善造成孵化率损失的原因,按比例可分为无精蛋42%、早死28%、中死6%和晚死24%。实践中种公鸡饲养管理经常出现的问题有:012周睾丸发育不良、1828周睾丸生长发育差、骨架发育不好、周增重不足、选种不良、均匀度较差及35周后公鸡不活跃等。公鸡管理成功等于鸡群饲养成功一半。因此为了维持种鸡40周后受精率的持续稳定,应关注以下重点。1 种公鸡40周后的生长发育源于早期良好的
为了揭示椰子CnumiR156基因家族的进化过程和表达模式,对CnumiR156家族9个成员的序列进行生物信息学分析及靶基因预测,找出开花途径靶基因,并结合转录数据对这差异表达的CnumiR156和开花途径靶基因进行RT-qPCR验证。序列比对发现不同的前体序列可产生相同序列的成熟miR156;进化树结果表明,CnumiR156-1和CnumiR156-3的亲缘关系较近,CnumiR156-2和C
目的:研究As2O3(IC50)剂量联合Notch-1通路阻断剂(γ-分泌酶抑制剂MW167)对人肝癌HepG2细胞以及HepG2/ADM耐药细胞生物特性、耐药性及血管生成拟态(VM)形成能力的影响,探讨其影响作用与Notch-1信号通路的关系,进一步分析探讨As2O3逆转肿瘤多药耐药的机制,为丰富逆转肿瘤多药耐药(MDR)方案提供实验数据。方法:1.实验以人肝癌HepG2细胞、HepG2/ADM
背景:世界上最高死亡率的恶性肿瘤——肺癌,需要放疗的肺癌患者大约有2/3。肺癌合并糖尿病患者常见于临床,糖尿病能增加代谢紊乱风险,对患者放疗耐受造成影响,使放射性肺炎并发风险、危害增加。近年来,由于放疗设备的更新和改进,放疗在肺癌治疗中的应用越来越广泛,它为提高靶区剂量、减少正常组织受量提供了物理学基础。但在放疗过程中,不可避免地使部分正常肺组织受到一定剂量的照射,使正常肺组织损伤而引起放射性肺炎
目的本研究建立在人体组织标本实验的基础上,检测了子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)患者与正常子宫内膜个体内膜组织中低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)的表达情况,分析了LDLR与临床病理特征的相关性,并初步探讨了LDLR在以肥胖为高危因素的EC中的作用。方法1.石蜡组织:选取EC患者(n=100)及正常子宫内膜个
目的:本研究拟通过体外肌条实验,用人干细胞白血病基因(SCL)重组慢病毒转染糖尿病膀胱病变(DCP)的膀胱,观察其对DCP膀胱逼尿肌收缩功能的影响,从而为DCP的治疗新方法提供理论依据及对治疗疗效进行验证。方法:1.DCP豚鼠模型的建立:选取体重350g-450g的雄性豚鼠,使用链尿佐菌素(STZ)溶于新鲜配制的p H 4.4、浓度0.1 mol/L枸橼酸溶液中,进行腹腔内注射(200mg/kg)
目的:运用机器学习方法建立并验证社区管理高血压病人服药依从性预测模型,探索分类算法、预测因子和生活方式依从性对服药依从性预测能力,以及人群分亚组建模对预测能力的影响。方法:采用横断面设计,典型抽样选择新疆生产建设兵团某师3个位于城市的社区和2个周边团场,于2017年7月采取面对面调查方式进行数据收集。使用自制调查表测量服药依从性、预测因子和生活方式依从性。单因素分析初步筛选与服药依从性关联有统计学
目的:通过检测Stat3/IL-17信号通路分子在胃炎、胃上皮内瘤变及胃癌组织中的动态活化及表达并分析这种动态变化对随访患者疾病病程以及生存预后的影响;联合检测p-Stat3、IL-17、p53及Ki-67在胃癌组织中的表达,开发一种可以定量分析预后危险因子并能在临床上实用的新方法。方法:(1)收集2007年11月—2017年12月石河子大学医学院第一附属医院病理科首次胃镜活检人群70,534例,
目的:采用纳米雄黄作用细粒棘球蚴原头节,测定纳米雄黄对细粒棘球蚴原头节生长的影响,观察纳米雄黄对细粒棘球蚴原头节光镜和电镜形态的影响,检测纳米雄黄对细粒棘球蚴原头节内SOD、ROS、GSH、Caspase-3指标变化,探讨纳米雄黄抗细粒棘球蚴治疗的可能性,以期为纳米雄黄在肝细粒棘球蚴病治疗的临床应用奠定基础。方法:收集感染细粒棘球蚴的绵羊肝脏,用无菌方法抽取肝脏上细粒棘球蚴囊泡中囊液至无菌容器中,