【摘 要】
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目的比较和鉴定尿毒症及尿毒症合并脑出血患者血清差异表达蛋白,筛选“特异性的蛋白质分子”作为尿毒症合并脑出血患者诊断及早期预警的生物标志物。方法收集南昌大学第一附属医院急诊科尿毒症患者血清及尿毒症合并脑出血患者血清各6例,另收集健康成人血清标本6例,将标本分为3组:(1)尿毒症患者组;(2)尿毒症合并脑出血患者组;(3)健康成人对照组。将各组患者血清进行蛋白提取及酶解,再将样品取适量肽段使用纳升流速
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目的比较和鉴定尿毒症及尿毒症合并脑出血患者血清差异表达蛋白,筛选“特异性的蛋白质分子”作为尿毒症合并脑出血患者诊断及早期预警的生物标志物。方法收集南昌大学第一附属医院急诊科尿毒症患者血清及尿毒症合并脑出血患者血清各6例,另收集健康成人血清标本6例,将标本分为3组:(1)尿毒症患者组;(2)尿毒症合并脑出血患者组;(3)健康成人对照组。将各组患者血清进行蛋白提取及酶解,再将样品取适量肽段使用纳升流速Easy nLC 1200色谱系(Thermo Scientific)进行色谱分离,肽段分离后用Q-Exactive Plus质谱仪(Thermo Scientific)进行DDA(数据依赖采集)质谱分,最终得到的LC-MS/MS原始数据导入Proteome Discoverer软件(版本号2.2)中的搜索引擎Sequest HT进行数据库检索。利用生物信息学分析及其在尿毒症脑出血病理生理学机制中的作用,筛选并鉴定差异表达蛋白作为生物标记物的候选蛋白,通过PRM方法对所筛选差异蛋白质进行验证。结果通过显著性差异分析,共得出三组实验结果,其中尿毒症与正常对比组显著差异表达蛋白共77个,上调蛋白71个,下调蛋白6个;尿毒症脑出血与正常对比组显著差异表达蛋白共43个,上调蛋白38个,下调蛋白5个;尿毒症脑出血与尿毒症患者对比组差异性蛋白共26个,均为下调蛋白。通过将三组数据归类并对比分析,共得出67个差异蛋白,根据细胞生物学分析,挑选6个差异表达蛋白作为候选标记蛋白,其中硫氧还原蛋白、凝血因子XIIIB链、Cu-Zn超氧化物歧化酶、磷酸组氨酸磷酸酶这4个候选蛋白在同位素标记定量蛋白质组学与PRM定量结果中变化趋势一致,具有统计学意义。结论同位素标记蛋白组学联合PRM验证方法发现硫氧还原蛋白、凝血因子XIIIB链、Cu-Zn超氧化物歧化酶、磷酸组氨酸磷酸酶在尿毒症合并脑出血的病理生理学机制中扮演着重要角色,有望作为预警尿毒症脑出血严重并发症的生物标记物。
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