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抗菌脂肽对多种病原微生物特别是真菌、细菌及支原体等有强烈的抗菌活性,在医药及生物防治等多个领域具有极大的应用潜力,但陆地来源有部分菌株存在脂肽产生能力弱及对特定病原菌株抗菌活性专一性薄弱等问题,一定程度上限制了脂肽产量发展,需要从新的微生物资源中筛选产脂肽能力强、抗菌针对性显著的脂肽产生菌株。红树林中的微生物类群所处耐盐、寡营养、厌氧、频繁的潮汐等特殊生活环境,造就了其微生物具有特殊的生理生化代谢途径及特殊的繁殖方式,按常规分离筛选方法难高效分离到产脂肽能力强的目标菌株;即使获得目标菌株,在不适合的发酵条件下其也会造成脂肽物质不易合成或不产。因此,本研究拟以红树林海域环境不同部位样本为筛选材料,利用溶血活性及表面活性结合脂肽合成酶基因PCR扩增进一步初步分离出有产脂肽的能力目标菌株,同时以TOF-MS深入研究产脂肽菌株发酵液中脂肽的组分。最后以LC-MS/MS和抑菌效果对目标分离菌株发酵发酵条件进行优化。为海洋源脂肽产生菌株的进一步应用奠定基础。1、本研究以红树林的树叶、树皮及海泥及其区域的海水作为样品分离出抗菌活性强及抗菌谱广的红树林源细菌菌株。以液体培养基筛选、抗菌谱测定及16SrDNA和系统发育树建立对分离目标菌株进行研究。结果表明,初筛选出40株海洋环境的细菌菌株,以点种法复筛发现仅有17株菌株有稳定的抗菌活性;在此基础下,发现在代谢活性物质抗菌效果中仅有6株菌株能在少数的培养基里合成抗菌物质,其中HY-5发酵上清液对26株供试菌株呈现出了抗菌谱广及活性强,可作为后续试验研究菌株。同时17株有抗菌活性菌株分别被为蜡样芽孢杆菌、假交替单胞菌、解淀粉芽孢杆菌、流河弧菌、短小芽孢杆菌、及弯曲芽孢杆菌等菌种。2、为快速及准确从上述不同的菌种筛出脂肽产生菌。以血平板法、排油法、脂肽合成酶基因PCR扩增结合TOF-MS分析进行研究,结果表明,有6株菌株产溶血活性,其中3株呈现出表面活性作用,有2株油层的透明圈的直径更是达了32 mm和45 mm。在此筛选的基础上,PCR扩增发现其中HY-5、HY-4和H N-9菌株都能检测到脂肽合成酶基因,除了它们都有Iturin合成酶调控基因外,HY-5和HY-4同时还具有Surfactin合成酶调控基因,HY-5还含有Bacillomycin合成酶调控基因,推测出HY-5有产Surfactin、Iturin和Bacillomycin的能力;H Y-4则有产Surfactin和Iturin的能力;HN-9有产Iturin的能力,再进一步对携带脂肽编码基因的3株细菌置于Landy培养基中培养,采用TOF-MS对其脂肽粗提取物进行分析,其中HY-5检测到3大类质谱峰,含3种抗菌脂肽Surfacti n(1031/1047、1061、1059/1075)、Iturin(1043、1057、1071)和Bacillomycin(1032/1054、1079、1093、);HY-4则检测到Surfactin(1044、1058)、Iturin(1043、1057、1071)和Bacillomycin(1065/1087/1103)3种抗菌脂肽类物质;HN-9检测到响应值特明显的组分(1054.5917、1087.6058),但不是常见的脂肽组分是否为脂肽类物质、需要进一步深入分析研究;PCR结合TOF-MS分析能快速、准确检测出脂肽产生菌及暗示了红树林不同的部位是获得脂肽产生菌的一个资源。3、对产脂肽种类丰富的解淀粉芽孢杆菌HY-5的接种量、转速、发酵时间及瓶装量等发酵条件进行研究,结果表明,产脂肽及抗菌效果最佳的发酵条件为接种量6%、转速为150 r/min、发酵时间为36h及瓶装量为40 mL/250 mL,优化后HY-5脂肽含量由0.245 g/L提高到了1.6 g/L,脂肽产量提高了6.8倍,突出了红树林源HY-5其产脂肽能力强,同时也发现发酵条件是影响HY-5脂肽产量一个显著的因素。