研究背景及目的肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种全球常见的恶性肿瘤,在所有实体肿瘤中发病率居第五位,肿瘤相关死亡率居于第四位。我国为原发性肝癌的高发区,近几年呈现发病率上升的趋势。尽管目前肝癌的治疗手段有了很大程度的进步,但是肝癌预后并不理想,五年生存率只有25%-39%。导致肝癌预后差的主要原因是恶性程度高、血管侵犯及肝内转移。肝癌的发病过程是多种因素共同作用的结果,其中遗传因素中最主要的是癌基因激活和抑癌基因失活。为了改善肝癌患者预后,有必要寻找新的早期诊断和有效治疗肝癌的分子靶点。TRIM3蛋白又称BERP蛋白,最初是作为作为α-辅肌动蛋白4结合蛋白而被克隆出来,但是它的具体功能目前并不是十分明确。TRIM家族蛋白在结构上均有功能相似的3个结构域(靠近N端的锌指结构域、位于中间的1-2个B-box结构域、C端的卷曲螺旋结构域),也因此而得名。近年来有多项研究证实TRIM家族蛋白成员与肿瘤的发生发展密切相关,有研究证实在恶性胶质瘤中TRIM3是一个新的抑癌基因,TRIM3发挥其抑制细胞生长的作用是通过抑制p21蛋白表达而起作用。TRIM3表达下调能促进细胞中p21的表达增加,并且能促进细胞增殖和小鼠肿瘤的生长和血管形成。过表达TRIM3可使细胞在细胞周期G0/1期累积,导致细胞生长阻滞。因此认为TRIM3可能是一个潜在的抑癌基因,然而,到目前为止,TRIM3在肝癌中的作用仍不清楚。本课题的目的是通过检测TRIM3基因在肝癌中的表达,分析其与肿瘤患者临床参数及预后的关系,并初步研究TRIM3在肝癌的发生过程当中的生物学功能。研究方法实时荧光定量RT-PCR、Western Blotting和免疫组织化学技术检测肝癌细胞系及肝癌组织标本中TRIM3的表达情况。通过转染TRIM3基因片段,使TRIM3蛋白在Hep G2和Bel-7402中过表达,研究TRIM3的表达对肝癌细胞生长(增殖、克隆形成)、细胞周期、细胞凋亡、细胞转移(迁移及侵袭)等生物学功能的影响。统计方法:配对t检验主要用于肝癌组织与癌旁正常组织TRIM3转录和蛋白表达的差异比较;卡方检验主要用于高表达组和低表达组临床参数之间的差异比较;生存分析用于比较高表达组和低表达组生存时间的比较;Cox回归分析主要用于研究与肝癌术后总体生存时间相关的影响因素。结果1.肝癌组织中TRIM3 m RNA和蛋白的表达水平显著低于配对的癌旁组织(p<0.05)。与肝正常细胞系LO2相比,TRIM3在肝癌细胞株中的表达下调,尤其是在Hep G2和Bel7402这两株肝癌细胞中。2.免疫组织化学法检测了129例石蜡包埋组织中TRIM3蛋白的表达情况,发现TRIM3蛋白主要表达在细胞浆中,相对于癌组织的低表达,癌旁的肝组织为高表达;TRIM3表达与肿瘤大小(P=0.034)、病理分级(P<0.001)、TNM分期(P=0.021)和血清AFP水平(P=0.025)显著相关;生存分析表明TRIM3低表达的患者预后不良,可作为肝癌患者独立的预后指标。3.构建过表达TRIM3的慢病毒表达载体,感染Hep G2和Bel7402细胞,发现过表达TRIM3能抑制肝癌细胞的增殖、克隆形成、以及迁移侵袭能力,诱导细胞周期阻滞于G1期,促进肿瘤细胞的凋亡。结论TRIM3在肝癌的发生发展中具有重要作用,可以作为肝癌分子靶向治疗的靶点和肝癌预后的一个独立指标。