【摘 要】
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本文以pET-21b载体构建了斑马鱼.Intelectin 2(zINTL2)的原核表达质粒,并得到了该蛋白的包含体,再经过稀释复性和亲和层析后得到了比较纯的zINTL2重组蛋白。同时制备了zlNTL2重
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本文以pET-21b载体构建了斑马鱼.Intelectin 2(zINTL2)的原核表达质粒,并得到了该蛋白的包含体,再经过稀释复性和亲和层析后得到了比较纯的zINTL2重组蛋白。同时制备了zlNTL2重组蛋白的兔血清多克隆抗体。
通过腹腔注射重组zINTL2进入成年斑马鱼,Real-Time PCR.检测IL-1,IFN-γ.TNF-α三个细胞因子水平的变化的结果显示,IFN-γ从6h开始上调,上调倍数呈线上升至36h, IL-1和TNF-α从6h开始上调,但是上升直至24h到达最高峰后下降。上调最大倍数均为6-8倍。这些结果表明zlNTL2可能直接或间接上调细胞因子,从而达到免疫保护的效果。
提前24 hr腹腔注射重组zlNTL2进入年斑马鱼后进行杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)刮伤浸泡感染后观察其存活情况显示,注射重组蛋白的斑马鱼比注射BSA的斑马鱼死亡速度慢,表明该蛋白有免疫保护的活性。抗体阻断实验进一步证明了这一点,注射兔抗zINTL2 IgG多克隆抗体的斑马鱼则比注射阴形血清的斑马鱼死亡加快。
上述实验表明,zlNTL2可能直接或间接上调细胞因子,从而达到免疫保护的效果。本论文的研究初步揭示了zlNTL2的功能,为进一步研究该基因在斑马鱼的先天性免疫系统中所起的作用及其作用机理打下了基础。
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