仙味保金方治疗过敏性支气管哮喘的代谢组学研究

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目的:在建立家兔过敏性支气管哮喘模型的基础上,通过动物实验,引入代谢组学,确定与过敏性支气管哮喘相关联的有意义代谢产物,完善仙味保金方治疗过敏性支气管哮喘机理的研究方法,探索过敏性支气管哮喘动物模型代谢物组变化研究的新模式。方法:将家兔适应性饲养7天无异常后,模型组家兔和仙味保金方组家兔予10%卵蛋白(OVA)生理盐水溶液腹腔注射,剂量为1.2ml/kg,对照组家兔予等剂量生理盐水腹腔注射。每只家兔均注射一次。14天后,对模型组、仙味保金方组家兔用1%0VA生理盐水溶液雾化激发;对照组用生理盐水雾化激发。连续雾化7日,每日一次,每次反复操作直至家兔出现腹肌抽搐、烦躁、唇鼻紫绀、二便失禁等表现。雾化激发结束后第四天进行灌胃治疗,考虑到中药复方药效缓和但药效持久的特点,共给药3天。根据人与动物体表面积换算公式计算得到每只家兔每日的灌胃量为:0.35g药粉。具体灌胃操作如下:第一步:先将0.35g药粉用温开水溶解定容至20ml药液,每只家兔20ml药液。第二步:将家兔固定于兔盒内,经灌胃管注入20ml药液。(对照组与模型组家兔则以同样方法注入等剂量生理盐水。)雾化激发结束后采取家兔耳缘静脉血、支气管肺泡灌洗液标本,用于嗜酸性粒细胞计数检测;灌胃治疗结束后采取家兔耳缘静脉血、支气管肺泡灌洗液和尿液标本,用于代谢组学检测。嗜酸性粒细胞计数统计分析应用SASV8软件,经方差齐性检验及正态性检验后,采用wilcoxon秩和检验,计量资料采用x±s表示;代谢产物统计分析采用单因素方差分析,计量资料采用x±s表示。结果:1.血清和支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞计数统计分析结果:在模型组计数与对照组相比均呈高表达(P<0.05)。2.家兔血清样本代谢产物统计学分析结果:异柠檬酸:对照组与模型组有差别(P<0.05),模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05);果糖:对照组与模型组有差别(P<0.05),模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05);葡萄糖酸:对照组与模型组无差别(P>0.05),模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05);6-脱氧吡喃甘露糖:对照组与模型组有差别(P<0.05),模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05);硬脂酸:对照组与模型组无差别(P>0.05),模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05);半乳糖醛酸:对照组与模型组有差别(P<0.05),模型组与仙味保金方组无差别(P>0.05)。3.家兔支气管肺泡灌洗液样本代谢产物统计学分析结果:甘氨酸:对照组与模型组有差别(P<0.05)、模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05);天冬氨酸:对照组与模型组有差别(P<0.05)、模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05);十四酸:对照组与模型组有差别(P<0.05)、模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05);半乳糖:对照组与模型组有差别(P<0.05)、模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05)。4.家兔尿液样本代谢产物统计学分析结果:对羟基苯乙酸:对照组与模型组无差别(P>0.05),模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05);木糖醇:对照组与模型组无差别(P>0.05),模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05);3,5-二羟基苯甲酸:对照组与模型组无差别(P>0.05),模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05);硬脂酸:对照组与模型组有差别(P<0.05)、模型组与仙味保金方组有差别(P<0.05)结论:1.卵蛋白致敏新西兰家兔可成功建立过敏性支气管哮喘模型。2.支气管肺泡灌洗液样本代谢产物中的甘氨酸、天冬氨酸、十四酸、半乳糖含量在模型组升高,说明与过敏性支气管哮喘病理变化有关。3.支气管肺泡灌洗液样本代谢产物中的甘氨酸、天冬氨酸、十四酸、半乳糖含量在仙味保金方组的含量比模型组明显降低,说明仙味保金方具有修复代谢网络的作用。4.血清样本代谢产物中的异柠檬酸、半乳糖醛酸、果糖、6-脱氧吡喃甘露糖在模型组含量改变,说明这些产物与过敏性支气管哮喘具有相关性。5.血清样本代谢产物中的异柠檬酸、果糖、葡萄糖酸、硬脂酸、6-脱氧吡喃甘露糖含量在仙味保金方组发生变化,说明这些产物与仙味保金方中药成分发挥作用有关。6.尿液样本代谢产物中的硬脂酸在模型组含量改变,说明与过敏性支气管哮喘具有相关性。7.尿液样本代谢产物中的对羟基苯乙酸、木糖醇、3,5-二羟基苯甲酸和硬脂酸在仙味保金方组含量改变,说明这些产物与仙味保金方中药成分发挥作用有关。
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