帕歌斯对EAE大鼠脊髓中NFP及CCL5表达的影响

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目的:观察药物帕歌斯(Pagosid,PGS)的干预对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠脊髓中神经丝蛋白(neurofilament protein,NFP)及CCL5(CC Chemokine Ligand5)表达的影响,探讨其对EAE是否有神经保护作用及可能的作用机制,为MS的临床治疗提供新思路和实验依据。方法:78只成年雌性Wistar大鼠随机分为5组:正常组(N组)、免疫诱导组(EAE组)、免疫诱导组+小剂量PGS组(LPGS组)、免疫诱导组+大剂量PGS组(HPGS组)、免疫诱导组+激素组(PAT组)。使用自制完全免疫抗原(GPSCH-CAF)诱导EAE模型。N组不作任何处理,EAE组造模后不予给药,LPGS组、HPGS组分别予以PGS20mg/kg· d、100mg/kg· d灌胃,PAT组予以醋酸泼尼松8mg/kg·d灌胃。比较各组大鼠的发病率并进行神经功能评分,并分别于第7天、第14天、第21天处死后取脊髓行Bielschowsky银染色、NFP及CCL5免疫组化染色。结果:1.各组实验大鼠的发病率:EAE组发病率为88.89%;PGS干预组及PAT干预组发病率较EAE组降低(P<0.05);HPGS组发病率较LPGS组低(P<0.05)。2.神经功能评分:在免疫诱导后第7天、第14天、第21天分别予以评分,在第14、21天,LPGS组、HPGS组及PAT组神经功能评分均低于EAE组;第14天HPGS组、PAT组神经功能评分低于LPGS组(P<0.05);三个时间点来比较,7天组、21天组与14天组比较,差异有统计学意义(P<0.05),而7天组与21天组比较没有统计学意义(P>0.05)。3.组织病理学:Bielschowsky银染色示N组轴索大多走形方向一致,结构紧密,连续性好,粗细较均匀,其余各组都不同程度地出现轴索改变,如结构紊乱,连续性破坏,空泡样缺失、断裂。4.免疫组织化学染色:4.1大鼠脊髓中NFP的表达:染色结果示五组均有NFP阳性表达,其中N组表达最多;EAE组NFP阳性表达较同期N组明显减少,而HPGS组、LPGS组、PAT组药物干预后,NFP阳性表达神经元数较同期EAE组增多,且差异有统计学意义(P<0.05);三个时间点比较,7天组、21天组与14天组比较,差异有统计学意义(P<0.05),而7天组与21天组比较没有统计学意义(P>0.05)。4.2大鼠脊髓中CCL5的表达:染色结果示除N组外,其余四组均有CCL5阳性表达,其中EAE组CCL5阳性表达较同期其他组明显增多;药物干预组CCL5阳性表达量有所减少,且HPGS组、PAT组CCL5表达量较同期LPGS组为低,差异有统计学意义(P<0.05);三个时间点比较,7天组、21天组与14天组比较,差异有统计学意义(P<0.05),而7天组与21天组比较没有统计学意义(P>0.05)。结论:1.帕歌斯的干预可减低EAE大鼠的发病率,改善其轴索损伤程度;其干预效应与剂量有关。2.帕歌斯的干预对EAE大鼠的神经保护作用机制可能与上调NFP、下调CCL5有关。
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