论文部分内容阅读
第一部分：葡萄籽多酚(GSP)诱导胆囊癌细胞系GBC-SD凋亡机制研究 目的 胆囊癌是目前预后较差的消化道肿瘤之一，其对放化疗、免疫治疗等均不敏感。因此，有必要寻新的治疗手段以提高胆囊癌的治疗效果，改善患者预后。葡萄籽多酚具有抗氧化、抗自由基损伤、酶抑制活性、细胞保护活性、抗血小板及抗肿瘤等活性。本实验采用胆囊癌细胞系GBC-SD为研究对象，从形态学、分子生物学、流式细胞学等各个方面研究葡萄籽多酚对胆囊癌细胞系GBC-SD生长抑制及诱导凋亡的作用，并对其作用机制进行初步探讨。 方法 葡萄籽多酚与胆囊癌细胞系GBC-SD作用后，MTT法检测不同浓度葡萄籽多酚对GBC-SD细胞的生长抑制率，瑞士-姬姆萨染色观察GSP处理后GBC-SD凋亡细胞形态，透射电镜观察凋亡细胞超微结构，凝胶电泳检测DNA Ladder，流式细胞仪检测细胞凋亡率及葡萄籽多酚处理后GBC-SD细胞Bcl-2、P53蛋白表达。 结果 GSP可抑制GBC-SD细胞的生长，其作用随药物浓度提高和作用时间延长而增强，呈现一定的剂量、时间依赖性。GSP作用后72h，GBC-SD细胞凋亡最明显，瑞士-姬姆萨染色及透射电镜观察核染色质浓缩成斑块，沿核膜收缩形成新月体状，有的裂解为数个致密体，形成凋亡小体。FCM检测发现3μg／ml、6μg／ml、12μg／ml、24μg／ml不同浓度的GSP作用后72h，GBC-SD细胞凋亡率分别为8.01±0.08％、13.27±0.12％、22.07±0.23％、36.59±0.37％，对照组GBC-SD细胞凋亡率为0.23±0.02％。3μg／ml、6μg／ml GSP作用72h，可见到明显的DNA断裂梯状(Ladder)带，3μg／mlGSP既可明显下调GBC-SD细胞