【摘 要】
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沙门氏菌在自然界有广泛的宿主,少数沙门氏菌对宿主有选择性,绝大多数对人和动物均适应,可寄居在各种生物的胃肠道中,比如哺乳类、昆虫等。种类繁多的家养和野生动物的感染率
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沙门氏菌在自然界有广泛的宿主,少数沙门氏菌对宿主有选择性,绝大多数对人和动物均适应,可寄居在各种生物的胃肠道中,比如哺乳类、昆虫等。种类繁多的家养和野生动物的感染率在1%~20%以上。沙门氏菌,可引起胃肠炎、伤寒、败血症等多种疾病,是四大食源性致病菌之一,防范、检测、消灭沙门氏菌具有非常重要的公共卫生意义。因此建立快速、简单、灵敏度高和特异性强的检测方法对于该菌的防控具有重要意义。本论文研究了偶联抗体的KMnF3纳米粒子与核磁共振相结合的方法,用于沙门氏菌的快速检测。研究KMnF3纳米粒子制备及表征、修饰,通过将沙门氏菌单抗与羧基化纳米KMnF3偶联制备抗体-KMnF3,并以此为NMR分子探针,以免疫纳米粒子为生物传感器,特异性地捕获并检测出样品中的致病菌。并对新方法的有效性进行了评估。主要研究结果如下所示:1、以0.3%甲醛灭活的鸭沙门氏菌菌体作为免疫原制备抗体2C11-F3,通过正辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水获取抗体。采用溶剂热法及改良方法制取KMnF3,并用带羧基的PEG对其进行修饰,获得20 nm的KMnF3粒子。并对其进行表征,其K、Mn和F的元素原子比1:1.02:2.95,和KMnF3的化学组成非常的相近,经XPS检查符合进一步检查要求。2、采用EDC/NHSS化学偶联法制备免疫KMnF3,对KMnF3的分离效果,不同缓冲液、菌龄等对核磁共振自旋晶格弛豫时间和自旋自旋弛豫时间的影响进行了探讨,缓冲溶液、洗脱液用蒸馏水效果较好,细菌培养7h就可以进行检测。3、随着沙门氏菌培养时间的增大,自旋晶格弛豫时间和自旋自旋弛豫时间也会增大。使用该方法能检测103-108CFU/mL的菌,检测下限为103-104CFU/mL。
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