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目的:大肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一,恶性程度较高,发病率有逐年上升的趋势。尽管治疗手段有了很大的进步,但五年生存率仍然较低。肿瘤的侵袭和转移是患者死亡的主要原因之一,因而,针对大肠癌侵袭和转移机制的研究已经成为热点。大肠癌的生物学行为复杂多变,预后影响因素诸多,发病机制不十分清楚。随着分子生物学和免疫学的发展,对大肠肿瘤的生物学行为、预后因素以及发病机制已经从分子水平有了新的认识。大量研究显示,核转录因子κB(Nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)在大肠癌的发生和转移等过程中发挥了较重要的作用,可能通过调控细胞的增殖、分化、凋亡及恶性转化影响肿瘤的发生发展。核转录因子(NF-κB)是一种分布和作用均十分广泛的真核细胞转录因子.它只有与其抑制因子I-κB(Inhibitor kappa B)解离后方能进入胞核,与靶基因上的κB序列特异结合,上调这些靶基因的表达,进而导致癌症的发生。国外研究也表明多种肿瘤组织中存在NF-κB的高表达和高活性现象。体内还存在天然的核因子κB的抑制物I-κB,可以抑制所有NF-κB的活性,影响肿瘤的侵袭和转移等过程。I-κB是一类NF-κB的抑制蛋白,通过非共价结合,I-κB掩盖NF-κB的核定位序列(NLS)而阻止NF-κB的核转位。一旦受到信号分子的刺激,NF-κB就从I-κB中释放出来,进入细胞核中。I-κB可以抑制NF-κB的活性,影响肿瘤的侵袭和转移等过程。我们以往的研究发现,大肠癌组织中含有较多的NF-κB.然而,目前对于大肠癌中NF-κB与大肠癌的侵袭和转移的关系的研究较少。本研究采用Western blot分析和免疫组化以及流式细胞学三种方法对大肠癌患者手术切除标本中NF-κB与I-κB的表达情况进行了研究,探讨NF-κB和I-κB在大肠癌中的表达特点、相互关系以及与大肠癌进展的相关性,试图为大肠癌的临床治疗以及判断预后提供有价值的参考指标。方法:1标本:选取河北医科大学第四临床医院外二科2005年3~7月间住院行外科手术治疗的大肠癌患者48例,分别取其肿瘤组织与相应正常组织,正常组织距肿瘤边缘至少10厘米。所有标本均经术后病理证实。2流式细胞术测定NF-κB:将选取的组织制备成单细胞悬液,分别用兔抗人NF-κB多克隆抗体和羊抗兔FITC-IgG二抗进行荧光标记,采用Epics-XLII型流式细胞仪,对NF-κB蛋白表达进行定量分析。3免疫组化染色:采用ABC法,按试剂盒说明进行操作。4 NF-κB及I-κB的Western blot分析:取150μg正常与大肠癌组织提取物蛋白样品进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,电转移至PVDF膜上。将印迹膜置于封闭液中封闭,随后与一抗(兔抗人NF-κB及I-κB多克隆抗体)及二抗反应。用数码成像分析系统软件对结果进行定量分析。结果:1对流式细胞结果进行分析证实,正常及大肠癌组织中均可检测到NF-κB的表达,大肠癌组织中NF-κB明显高于正常组织,差异具有显著性(P<0.01);侵及浆膜或周围软组织的大肠癌组织中NF-κB显著高于侵及肌层者(P<0.05);伴淋巴结转移的大肠癌组织中NF-κB明显高于无淋巴结转移者(P<0.05);随着肿瘤Dukes分期的进展,NF-κB的水平呈逐渐升高趋势。2 NF-κB的Western blot分析:大肠癌组织中NF-κB的表达量明显高于正常组织(P<0.01);侵及浆膜或周围软组织的大肠癌组织中NF-κB的表达量明显高于侵及肌层者(P<0.01),伴淋巴结转移的大肠癌组织中NF-κB的表达量明显高于无淋巴结转移者(P<0.05)。分化程度低的大肠癌组织中NF-κB的表达量明显高于分化程度高者(P<0.01)。随着肿瘤Dukes分期的进展,NF-κB的表达量逐渐升高。I-κB的Western blot分析:(1)大肠癌组织中I-κB的表达量明显低于正常组织(P<0.01);侵及浆膜或周围软组织的大肠癌组织中I-κB的表达量低于侵及肌层者,但差异无显著性(P>0.05);伴淋巴结转移的大肠癌组织中I-κB的表达量低于无淋巴结转移者,差异无显著性(P>0.05)。分化程度低的大肠癌组织中I-κB的表达量明显低于分化程度高者(P<0.05)。随着肿瘤Dukes分期的进展,I-κB的表达量逐渐降低。(2)大肠癌组织中磷酸化I-κB的表达量明显高于正常组织(P<0.01);侵及浆膜或周围软组织的大肠癌组织中磷酸化I-κB的表达量高于侵及肌层者,但差异无显著性(P>0.05);伴淋巴结转移的大肠癌组织中磷酸化I-κB的表达量高于无淋巴结转移者,差异无显著性(P>0.05)。随着肿瘤Dukes分期的进展,磷酸化I-κB的表达量逐渐升高。3免疫组化:大肠癌组织中NF-κB的阳性染色颗粒明显多于正常组织,大肠癌组织中I-κB的阳性颗粒明显低于正常组织,且与肿瘤分化程度及侵袭性相关。以上结果与流式细胞和Western blot分析结果相一致。NF-κB的阳性表达颗粒主要分布在肿瘤细胞的胞浆中,细胞核也有分布。I-κB多表达于胞浆。结论:1大肠癌组织中NF-κB的活性和表达量明显高于正常组织,并且随着肿瘤侵犯深度的加深、淋巴结的转移以及Dukes分期的进展而升高,提示NF-κB在大肠癌的侵袭和转移过程中发挥着重要的作用。2大肠癌组织中I-κB的活性与表达量明显低于正常组织。磷酸化I-κB的活性与表达量明显高于正常组织,提示I-κB的降解和磷酸化可能有助于大肠癌的进展。大肠癌分化程度低者I-κB的表达量低于分化程度高者,提示I-κB水平可能影响大肠癌的预后。3大肠癌分化程度低者NF-κB的表达量高于分化程度高者,复发者高于未复发者,提示NF-κB水平可能影响大肠癌的预后。