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目的:
基于反复实验研究证实对实验性脂肪肝有显著防治作用的临床验方祛湿化瘀方,以其方中部分已知组分,探求具有防治NAFLD效应的由中药有效组分组成的复方。
方法:
实验一配方筛选:采用高脂饮食(10%猪油+2%胆固醇+88%基础饲料)诱导的大鼠NAFLD模型(8周),以祛湿化瘀方中已知组分虎杖苷、姜黄素、绿原酸、栀子苷、白术多糖为研究对象,运用均匀设计法“5因素10水平设计表”分组设计,在造模第4周起分别灌胃给药5周后取材,以肝脏甘油三酯(TG)含量作为疗效判定的筛选指标,通过均匀设计多元回归分析,筛选出“有效组分配方”。
实验二配方验证:采用上述大鼠模型及其造模给药方法周期,根据实验一筛选到的“有效组分配方”(绿原酸+白术多糖+栀子苷),设正常组、模型组、有效组分配方组、祛湿化瘀方组共4组(各组n=10)。取材后观察和检测:(1)肝组织病理变化(HE染色、油红染色);(2)肝组织TG含量及肝组织FFA含量变化。(3)血清ALT、AST活性及TG、FFA、HDL、LDL含量变化,分析验证疗效。
实验三运用基因芯片技术对实验二正常组、模型组、配方各组肝组织进行基因表达谱检测(各组随机取3个样本),分析配方组与模型组差异表达基因及其相关代谢通路,为后续药理研究切入点提供线索。
结果:
1、筛选试验结果:模型组大鼠肝组织TG含量达正常组的4倍(P<0.01),肝组织出现明显的脂肪变性,提示模型成功。针对均匀设计各组肝组织TG含量检测结果,成功获得回归方程。获得其方程的理论最大效应配比剂量的“有效组分配方”,为:绿原酸3.33mg/kg+白术多糖266mg/kg+栀子苷45mg/kg。
2.验证实验结果:模型组大鼠较正常组肝组织TG、FFA含量及血清ALT、AST活性显著升高。有效组分配方的肝组织TG、FFA含量和血清ALT、AST活性显著低于模型组,并与祛湿化瘀方组效应总体相当。
3.有效组分配方与模型组差异基因表达分析显示主要与代谢信号通路、胰岛素信号通路、脂肪细胞信号通路等有关。
结论
1.由绿原酸、白术多糖、栀子苷特定量比组成的有效组分复方有理想的防治高脂饮食诱导的实验性脂肪肝的效应,有进一步研发前景。
2.该有效组分复方的作用环节可能与代谢信号通路、胰岛素信号通路、脂肪细胞信号通路等有关。是后续药理研究的重要切入点。