30nm染色质纤维的体外重组和结构分析

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真核生物的基因组以染色质的形式存在,染色质在真核生物的基因表达调控及胚胎发育过程中起重要作用,为表观遗传提供一个重要的信息整合平台。染色质的高级结构,特别是30nm染色质的动态变化在基因转录沉默和激活过程中起着重要的调控功能。但是目前对30nm染色质纤维的组装及其精细结构的认识还十分有限。本论文中,通过染色质体外组装体系,运用601核小体强定位DNA序列,体外重组30nm染色质纤维。然后利用负染制样及冷冻制样方法,通过单颗粒重构技术,解析了较高分辨率的两类30nm染色质纤维的结构(不含组蛋白H1及含有组蛋白H1)。结果显示:在没有组蛋白H1存在,含有MgCl2(1mM)的情况下,染色质形成“Zig-Zag”构象的双排“平行”结构,染色质双排间扭曲角度很小;在含有组蛋白H1,但不含有MgCl2的情况下,染色质纤维仍以“Zig-Zag”构象存在,形成一种有较大扭曲的双排结构。总体而言,这两种染色质的结构均符合左手two-start螺旋模型。
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