目的:HLA-A2限制性9肽表位的2个主要锚点是位于肽链第2位的氨基酸残基和第9位的氨基酸残基(即羧基末端),当第2位的氨基酸残基为亮氨酸(L)或蛋氨酸(M),第9位的氨基酸残基为亮氨酸(L)、缬氨酸(V)或异亮氨酸(Ⅰ)时,多肽与HLA-A2分子亲和力较高,成为HLA-A2限制性CTL表位的可能性极大,对表位采取氨基酸置换修饰的方式,可以鉴定出结合力更高又同时保留原有抗原性的新表位。本研究采用氨基酸置换对人乳头瘤病毒16型E7抗原的人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞表位HPV16E711-20进行修饰和鉴定。
　　 方法:运用量化模体方案对置换后的多肽与人白细胞抗原A2分子的结合系数进行比较,选择结合系数较高的多肽、以分子模拟方法探讨多肽与人白细胞抗原A2分子的结合情况,模拟结合较好的多肽确定为合成序列,采用标准Fmoc方案进行合成与纯化目标多肽,以标准51Cr释放试验检测特异性细胞毒性T细胞诱导活性来鉴定合成肽的免疫原性。
　　 结果:经过氨基酸置换修饰后的多肽,结合系数显著提高,分子模拟结合表明修饰多肽符合人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞的表位要求,合成肽纯度符合实验要求,质谱鉴定表明合成肽实际分子量与理论分子量相符。经过免疫原性鉴定,修饰后的十肽YLLDLQPEVT能够诱导细胞毒T细胞杀伤效应,具有特异性细胞毒性T细胞诱导活性。
　　 结论:氨基酸置换修饰后的多肽表位YLLDLQPEV工具有更好的结合力和较强的免疫原性,可以代替原有序列E711-20(YMLDLQPETT)作为人乳头瘤病毒感染治疗性肽疫苗分子设计的候选表位。