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染色体3p21.3区域的杂合性丢失是肺癌高发和早期的遗传学变异,2000年,Dammann在这一区域克隆出基因RASSF1A,研究发现它在细胞周期调控,细胞骨架构建和稳定、有丝分裂监控以及肿瘤转移中发挥重要的作用。
本研究分成3个部分对RASSF1A的功能进行了研究:
1将野生型RASSF1A转染入不表达该基因的NSCLC细胞系A549中,分析该基因的外源性表达对A549细胞的生物学性状的影响。实验中,通过流式细胞仪检测瞬时转染该基因对A549细胞周期的影响以及是否诱发凋亡;通过绘制细胞生长曲线,MTT检测,以及集落形成实验来分析稳定转染细胞的增殖能力。结果发现瞬时转染RASSF1A使细胞周期阻断在G1/S期(p<0.001)但未见凋亡发生;稳定转染该基因的细胞其增殖能力和集落形成能力均显著下降(p<0.01)。
2将RASSF1A转染进入A549和H460,筛选得到稳定表达细胞系。
3采用westernblot的方法,检测36例NSCLC术后癌组织标本及相应癌旁正常组织中RASSF1A蛋白的表达水平差异,结果发现72.2%的肿瘤组织中RASSF1A的蛋白表达缺失或下调,而与此对应的癌旁正常组织却100%表达RASSF1A(p<0.01)。
通过上面的实验,我们了解到RASSF1A确实是一个有着明显作用的抑癌基因,它在抑制肺癌细胞的生长和转移性上都发挥着重要的作用,它的作用机理值得进行更深入的研究。