【摘 要】
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目的:研究血管紧张素转化酶2（ACE2）在不同进展阶段肾透明细胞癌（cc RCC）患者的表达、预后以及下游血管紧张素1-7[Ang-（1-7）]对TGF-β诱导下肾透明细胞癌转移能力和上皮-间质转化的影响及其相关的调控机制。方法:利用来自Gene Expression Omnibus（GEO）数据库,International Cancer Genome Consortium（ICGC）数据库和T
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目的:研究血管紧张素转化酶2（ACE2）在不同进展阶段肾透明细胞癌（cc RCC）患者的表达、预后以及下游血管紧张素1-7[Ang-（1-7）]对TGF-β诱导下肾透明细胞癌转移能力和上皮-间质转化的影响及其相关的调控机制。方法:利用来自Gene Expression Omnibus（GEO）数据库,International Cancer Genome Consortium（ICGC）数据库和The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据库的肾透明细胞癌独立研究队列（GSE73731、GSE167093、GSE150404、ICGC-RECA-EU、TCGAKIRC）的转录组数据以及来自重庆医科大学附属第二医院病理科28例肾透明细胞癌患者术后病理切片的免疫组织化学染色以比较ACE2在不同进展时期的表达。通过Kaplan-Meier生存分析、单因素及多因素COX分析ACE2在TCGA-KIRC队列的预后意义。通过划痕实验和Transwell实验分析Ang-（1-7）对体外TGF-β诱导的cc RCC的细胞系（786-O、OS-RC-2和Caki-1）迁移和侵袭的影响。通过无监督一致性聚类鉴定基于6个关键EMT转录因子编码基因（SNAI1、SNAI2、TWIST1、TWIST2、ZEB1、ZEB2）和共同调控的上皮标志物E-cadherin（CDH1）的肾透明细胞癌进展期患者的EMT亚型。通过蛋白质免疫印迹、细胞免疫荧光分析EMT相关标志物Ecadherin,N-cadherin和Vimentin的表达。通过建立尾静脉注射Caki-1细胞转移瘤模型评估Ang-（1-7）在体内对肺部肿瘤转移的影响。结果:ACE2的表达在Stage III/IV期,Grade3/4级的患者中相比Stage I/II期和Grade1/2级的患者显著下调（P＜0.05）。单因素COX分析和多因素COX分析提示ACE2是cc RCC患者的独立预后因素（P＜0.001）。此外,不同分层下的患者,高表达ACE2患者的总生存期（OS）显著优于低表达患者（P＜0.05）。Ang-（1-7）能够抑制TGF-β诱导的786-O、OS-RC-2和Caki-1细胞的侵袭和迁移以及调控EMT蛋白标志物E-cadherin的表达（P＜0.05）。一致性聚类将高级别分期（Stage III/IV）患者分为2个亚型C1和C2,C2患者表现出高Snail表达、低E-cadheirn表达、更差的总体生存和无进展生存（P＜0.05）。而ACE2在C1亚型患者中与6个EMT-TFs、E-cadherin及TGF-β不具备相关性（P＞0.05）,但在C2亚型患者中与Snail、Ecadherin和TGF-β显著相关（P＜0.001）。体外实验证实Ang-（1-7）能够通过伴或不伴TGF-β诱导的方式抑制Snail分子的表达,且能够降低TGF-β诱导下ERK/MAPK通路磷酸化水平。此外,Ang-（1-7）能够在体内抑制小鼠的肺部肿瘤转移。结论:（1）ACE2在肾透明细胞癌患者中表达下调且高表达ACE2与预后良好有关。（2）ACE2效应分子Ang-（1-7）能够在体外和体内抑制TGF-β诱导下的肾透明细胞癌的转移和EMT分子表达。（3）Snail可能是介导cc RCC患者进展的关键EMT转录因子,Ang-（1-7）能够直接抑制Snail的表达同时也能抑制TGF-β诱导下Snail的表达和ERK/MAPK通路的磷酸化。
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