【摘 要】
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目的:胃癌是严重影响人类健康的、常见的恶性肿瘤其病因迄今尚未完全明了,治疗效果仍很不理想,人端粒酶逆转录酶(hTERT)作为端粒酶的限速酶,已成为肿瘤诊断和治疗的重要靶点
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目的:胃癌是严重影响人类健康的、常见的恶性肿瘤其病因迄今尚未完全明了,治疗效果仍很不理想,人端粒酶逆转录酶(hTERT)作为端粒酶的限速酶,已成为肿瘤诊断和治疗的重要靶点但其调控极其复杂,本课题运用甲基化特异性 PCR(MSP)方法检测不同分化的人胃癌细胞系 hTERT 基因启动子区域甲基化情况,探讨人胃癌细胞系在该区域是否存在甲基化,甲基化程度是否与肿瘤的恶性程度相关,以进一步解释胃癌细胞恶变的机制,并通过对端粒酶阳性正常的人永生化细胞及端粒酶弱阳性的正常人淋巴细胞该区域的甲基化检测,进一步探讨 DNA 甲基化对 hTERT 基因调控的价值,为以 hTERT 为靶点的肿瘤基因治疗提供一个新的思路。 方法:取对数生长期的胃中分化腺癌细胞 SGC-7901 和低分化腺癌细胞 BGC-823,分别以人乳腺癌细胞 MCF-7 及正常人脐静脉内皮细胞ECV-304 及淋巴细胞作为阳性对照,以正常人胚肺成纤维细胞 WI-38作为阴性对照。采用改进高盐法提取不同细胞的基因组 DNA,紫外分光光度计确定核酸纯度,并定量。高纯度的基因组 DNA 应用野生型引物采用热启动(Hot-start)及(Touch-down)降落式聚合酶链反应,检测未经修饰的原始 hTERT 核心启动子区域部分序列,判定胃癌细胞是否
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