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目的:观察黄芪注射液对糖尿病溃疡创面的治疗效果,探讨其促进糖尿病溃疡创面愈合的作用机制。方法:将192只大鼠除正常对照组外,其余大鼠腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)建立糖尿病模型(diabetes mellitus,DM),随机分为糖尿病模型组、表皮生长因子组、黄芪注射液小剂量组、黄芪注射液中剂量组及黄芪注射液大剂量组。8周以后在大鼠背部作以深达深肌膜、直径为20mm的全层皮肤缺损开放性创面,即糖尿病溃疡模型(diabetic ulcer,DU)。于创面造模后第2天开始药物干预,观察创面愈合率、创面愈合时间;在创面愈合过程中(造模后的第7天、第14天、第21天),切取创面内及创周皮肤组织,采用HE染色观察创面组织形态结构的变化;应用免疫组化观察β1整合素、K19、PCNA的水平变化;运用Western Blot、Real Time-q PCR等相关技术,分别从m RNA和蛋白水平,观察Wnt1、Wnt3a、β-catenin、GSK3β、Cmyc、Cyclin D1的表达变化,以细胞信号转导通路及表皮干细胞角度,围绕“上皮化-Wnt/β-Catenin信号转导通路-创面修复”重要病理机制,探讨黄芪注射液促进糖尿病性溃疡愈合的作用机制。结果:1、动物糖尿病造模情况:糖尿病模型组大鼠注射STZ之后,体重、血糖较正常对照组有明显差异(P<0.05)。2、创面愈合率、创面愈合时间比较:DU组创面造模后第3、7、14、21天,创面愈合率均明显低于正常创面组(P<0.01);创面造模后第14、21天,黄芪注射液大剂量组创面愈合率高于DU组(P<0.01)。DU组与正常创面组比较,创面愈合时间明显延长(P<0.01);各药物干预组中,黄芪注射液大剂量组创面愈合时间少于DU组(P<0.05)。3、创面组织免疫组化结果显示:在创面造模后第7、14、21天,DU组创面组织K19、β1整合素、PCNA的表达均明显低于正常创面组(P<0.01);在这三个时间点,黄芪注射液大剂量组、表皮生长因子组创面组织K19、β1整合素、PCNA的表达均高于DU组(P<0.01),黄芪注射液大、中剂量组K19、β1整合素、PCNA表达高于黄芪注射液小剂量组(P<0.05)。4、创面组织Western Blot结果:在创面造模后第7、14、21天,DU组创面组织β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白的表达均明显低于正常创面组(P<0.01),DU组β-catenin核内表达低于正常创面组(P<0.01),DU组GSK-3β的表达高于正常创面组(P<0.05)。在这三个时间点,各药物干预组与DU组相比,表皮生长因子组、黄芪注射液大、中剂量创面组织β-catenin、β-catenin核内、C-myc的表达均高于DU组(P<0.05);在GSK-3β的表达上,创面造模后第7、14天,表皮生长因子组、黄芪注射液大剂量组均低于DU组(P<0.05)。创面造模后第7、14、21天,黄芪注射液大剂量组β-catenin、β-catenin核内蛋白的表达均高于小剂量组(P<0.01),创面造模后第14、21天,GSK-3β的表达明显低于黄芪注射液小剂量组(P<0.01)。5、创面组织Real Time-q PCR结果显示:在创面造模后第7、14、21天,DU组创面组织β-Catenin m RNA表达明显低于正常创面组(P<0.01),GSK3βm RNA的表达高于正常创面组(P<0.01);这三个时间点,各药物干预组与DU组相比,表皮生长因子组、黄芪注射液大剂量组创面组织β-Catenin m RNA表达高于DU组(P<0.05),且GSK3βm RNA的表达低于DU组(P<0.05);在创面造模后第7、14天,黄芪注射液大剂量组β-Catenin m RNA表达高于黄芪小剂量组(P<0.05),而同时GSK3βm RNA表达低于黄芪小剂量组(P<0.05)。对于创面组织Wnt1、wnt3a m RNA的表达上,在创面造模后第7、14、21天,DU组表达均明显低于正常创面组(P<0.01);各药物干预组与DU组相比,黄芪注射液大剂量组、表皮生长因子组Wnt1 m RNA、Wnt3a m RNA的表达均高于DU组(P<0.05);创面造模后第14、21天,黄芪注射液大剂量组Wnt3a m RNA的表达高于黄芪小剂量组(P<0.01)。结论:1.黄芪注射液能提高糖尿病溃疡的创面愈合率,缩短创面愈合时间,有效促进糖尿病溃疡的愈合,且存在着一定的量效关系。2.黄芪注射液可能与Wnt/β-catenin信号通路活化有关,通过上调Wnt1、Wnt3a、β-catenin的表达,启动通路下游靶基因C-myc、Cyclin D1的转录,提高C-myc、Cyclin D1的表达而起到调节Wnt/β-catenin信号通路的作用,促进创面肉芽组织增生,促进表皮干细胞的增殖分化,加快创面上皮化的进程,从而促进糖尿病溃疡的愈合。