目的探讨人类卵丘细胞(CCS)的基因转录组中是否存在影响卵母细胞异常受精的生物标志物。方法1.筛选由于输卵管因素导致不孕的患者,常规长方案进行促排卵,阴道B超引导下取卵,获得卵丘-卵母细胞复合体(COC),在受精前半小时,用机械方法对受试者外围部分卵丘细胞进行切割,获取20-30个卵丘细胞团,透明质酸酶消化处理,分装无菌管保存,余下的卵子结构进行微滴受精(每滴一个卵子)。受精后17-20小时,拆除卵子周围剩余的卵丘细胞,将受精后的合子放于2 00×倒置显微镜下观察受精情况并进行微滴培养。同一受试者对应的单原核以及多原核受精卵的卵丘细胞进行混合,为异常受精组;正常受精(双原核)卵子的的卵丘细胞进行混合,为正常受精组。2.共设立3个重复,每个重复分正常受精组、异常受精组卵丘细胞。分开提取卵丘细胞总m RNA,构建c DNA文库,进行逆转录组测序。3.在Illumina Hi Seq平台上测序,将得到的FPKM(Fragments Per Kilobase Million)进行数据映射。获得的数据进行RNA-Seq相关性检查分析样本间基因表达水平的相关性,整体质量控制和过滤达到数据标准化和校正。4.筛选出的差异表达基因进行基因本体论GO分析(Gene Ontology)和KEGG分析(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes);结果我们的差异表达基因分析显示了丰富的基因种类及细胞通路。第一位受试者正常受精(MNF)、异常受精(MAF)时表达显著差异的基因有163个(其中上调30个;下调133个);第二位受试者正常受精(WNF)、异常受精(WAF)时表达显著差异的基因有493个(其中上调379个;下调114个);第三位受试者正常受精(LNF)时、异常受精(LAF)时表达显著差异的基因有200个(其中上调113个;下调87个)。3位受试者异常受精组分别与正常受精时相比均显著上调的基因有40个,均显著下调的基因有11个。KEGG通路分析3位受试者均显著表达的基因,发现上调基因与卵母细胞生长、成熟、增殖、分化、存活、凋亡、生物粘附,激素分泌、免疫,肿瘤发生、有丝分裂及受精过程有关,下调基因与细胞物质代谢及内分泌调节有关。结论实验共发现4个可能与异常受精相关的差异基因,分别是:BMP2、SESN3、CDK6、GRLF1(ARHGAP35),这些基因均表达显著上调。下调基因中未见明显与异常受精相关的表达。通过对实验数据的分析及大量相关文献的查阅,我们发现SESN3可能存在潜在的调控卵母细胞异常受精的机制,SESN3对细胞异常受精过程的影响尚需进一步QRT-PCR的验证。