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第一部分 MS-275联合顺铂对ErbB3过表达膀胱尿路上皮癌细胞的杀伤作用及机制研究目的ErbB3是表皮生长因子受体(ErbB/HER)家族的一员,其在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用。我们的前期研究通过慢病毒转染的方式获得了 ErbB3过表达的人膀胱尿路上皮癌(BTCC)细胞株,并发现ErbB3过表达的人膀胱尿路上皮癌细胞株会对顺铂(DDP)等化疗药物产生耐药。有研究表明MS-275可抑制ErbB3蛋白在ErbB2过表达的人乳腺癌细胞中的表达并促进其凋亡。本研究使用MS-275及DDP单药和联合用药处理,观察MS-275和DDP对ErbB3过表达的人膀胱尿路上皮癌细胞株的杀伤作用,观察MS-275是否能逆转ErbB3过表达的人膀胱尿路上皮癌细胞株对顺铂的耐药并初步探讨其可能机制。方法1、MTS法检测ErbB3过表达组(T24-ErbB3、J82-ErbB3)、空转慢病毒组(T24-CV、J82-CV)、空白对照组(T24、J82)在不同浓度梯度MS-275、DDP单独用药以及联合用药下的存活情况,绘制存活曲线进行比较分析。2、Western Blotting检测同一浓度不同时间及不同浓度同一时间MS-275、DDP单独用药及两者联合作用对T24-ErbB3细胞凋亡相关蛋白PARP、Caspase8表达水平的影响。3、Western Blotting检测同一时间不同浓度MS-275作用对T24-ErbB3细胞信号通路相关蛋白表达水平的影响。结果:1、MTS结果提示:三组细胞均随着MS-275、DDP单药浓度递增,细胞存活率逐渐递减。ErbB3过表达组细胞较另外两组对MS-275更敏感,而对DDP更加耐药,组间差异有统计学意义(P<0.05)。MS-275、DDP两者联合用药时,随着药物浓度递增,联合用药组及单用DDP组细胞存活率均逐渐递减,两种药物联合使用杀伤作用要高于同浓度DDP单药(P<0.05),MS-275和DDP两药具有协同作用。2、Western Blotting分析显示:在不同浓度及不同时间MS-275、DDP单药作用下,T24-ErbB3凋亡相关蛋白PARP、Caspase8表达水平升高;MS-275、DDP两者联合用药时,联合用药组PARP、Caspase8变化程度高于MS-275及DDP单独用药组。同一时间不同浓度MS-275处理后T24-ErbB3细胞内ErbB3水平明显降低,Akt及Survivin表达水平降低。结论:MS-275不仅本身对ErbB3过表达BTCC细胞具有杀伤作用,且能增强ErbB3过表达BTCC细胞对顺铂的敏感性,逆转ErbB3过表达BTCC细胞对顺铂的耐药。MS-275与顺铂在肿瘤细胞杀伤作用上具有协同作用。这种协同作用的可能机制是MS-275可下调ErbB3表达,阻断ErbB3-PI3K/Akt信号通路,下调抗凋亡蛋白Survivin水平,进而诱导细胞凋亡。第二部分 人膀胱尿路上皮癌及癌旁组织中ErbB2、ErbB3及Survivin的表达研究目的观察ErbB2、ErbB3、Survivin蛋白在人膀胱尿路上皮癌组织及其相应癌旁组织中的表达情况;分析比较ErbB2、ErbB3、Survivin蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中的表达与膀胱癌临床分期及病理分级的关系;探讨ErbB2、ErbB3、Survivin蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中表达之间的相关性。方法收集2014年3月至2016年3月于厦门大学附属东方医院因膀胱癌行根治性全膀胱切除术或膀胱部分切除术的手术标本,共20例。采用超敏二步法免疫组化方法进行检测,ErbB2、ErbB3选用乳腺癌已知阳性组织切片作阳性对照,Survivin选用大肠癌已知阳性组织切片作阳性对照,PBS液代替一抗作为阴性对照。双盲法观察阳性反应,由两名病理医师在未知患者临床资料的情况下根据切片免疫组化染色的阳性细胞率对结果进行分级。结果在20例膀胱尿路上皮癌组织中12例(60%)呈现ErbB2阳性表达,16例(80%)ErbB3阳性表达,14例(70%)Survivin阳性表达;而在癌旁组织中,ErbB2阳性表达3例(15%),ErbB3阳性表达6例(30%),Survivin阳性表达2例(10%)。三种蛋白在膀胱癌组织与其相应的癌旁组织中的表达存在明显差异,差异有统计学意义(P<0.05)。ErbB2、ErbB3及Survivin的表达与膀胱癌肿瘤的临床分期和病理分级无关,膀胱癌组织中ErbB3与Survivin的表达阳性率间存在较强的相关性(r=0.771,P<0.01)。结论:ErbB2、ErbB3及Survivin在膀胱癌组织中表达阳性率较高;在膀胱癌中,ErbB3与Survivin表达之间有较强的相关性,二者可能具有协同作,共同参与膀胱癌发生、发展的调控及化疗药物的耐药。ErbB3有望成为膀胱尿路上皮癌靶向治疗的新靶标,MS-275在对ErbB3过表达膀胱癌的化疗上有广阔的应用前景。