开花是种子植物生活史中最重要的事件之一。以往的研究表明,植物成花调控的关键基因相对保守,过量表达一年生草本或多年生木本来源的开花素基因Flowering Locus T(FT)及与之互作的b ZIP家族转录因子基因Flowering Locus D(FD)等成花促进基因均能够使转基因植株提早开花。作为研究多年生木本植物,苹果中的Md FT1/2基因的早花功能早在2010年就已被鉴定,但对于Md FD基因至今尚无报道。本研究通过生物信息学分析、表达分析、转基因植物表型鉴定、酵母双杂交和双分子荧光互补等方法对苹果Md FD基因的功能及其与Md FT1的相互作用进行了初步研究,并以山定子与早花山定子为试材,对重要的开花调节相关基因的表达及其启动子差异进行了分析。主要结果如下:1.利用DNAMAN、MAGE等在线分析软件对Md FD基因进行生物信息学分析,发现Md FD与枇杷中FD同源基因亲缘关系最近,开放阅读框为840 bp,包含3个外显子和2个内含子,编码279个氨基酸残基,其蛋白的分子量为30.207 k Da,等电点10.01,为亲水性蛋白质。利用在线分析软件Plant CARE对Md FD基因启动子序列进行分析,结果显示该基因启动子序列中含有光响应元件、昼夜节律调控元件、ABA、生长素及Me JA等植物激素响应元件。2.利用荧光定量PCR对Md FD基因的季节性表达特征进行分析,发现MdFD基因存在两个表达高峰,分别出现在九月和次年一月份,在四月份和五月份表达量低。3.构建了MdFD基因过表达载体,农杆菌介导遗传转化野生型拟南芥和fd突变体,对MdFD基因的功能进行鉴定。结果显示与对照植株相比,转基因拟南芥能够早花。构建酵母双杂交表达载体及双分子荧光互补表达载体,对Md FD与Md FT1的相互作用进行分析。酵母双杂交分析显示,Md FD蛋白具有自主激活活性,自身能形成同源二聚体,Md FD与MdFT1蛋白互作;双分子荧光互补显示,在植物体内MdFD与MdFT1蛋白互作。4.对不同开花相关基因进行表达特征分析显示,早花山定子中Mb FD、Mb FT1、Mb AP1等多个重要开花相关基因的表达均高于山定子;对两份资源启动子序列进行比较发现,山定子和早花山定子Mb AP1基因启动子序列上的顺式作用元件存在差异。