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利用稀释涂布平板法,从黑胫病烟株的根部土壤中筛选获得了3株防治黑胫病的高效拮抗菌XCS007、YBM-4和YJC-4。通过对峙培养法和牛津杯法验证了3株拮抗菌及其粗提物对烟草黑胫病的抑菌效果。探究了3株拮抗菌的最适生长条件（温度、初始pH和培养时间）,利用形态学、生理生化特性和16S rDNA序列相似性分析,对3株拮抗菌的系统分类地位进行了鉴定。同时,测定了几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性,在盆栽和大田试验中,调查了XCS007及其粗提物、YBM-4、YJC-4和XCS007+YBM-4+YJC-4混剂（比例1:1:1）的防病和控病效果。具体如下:1.从烟草黑胫病病株根部土壤中筛选获到324株细菌,利用对峙培养法,得到XCS007、YBM-4和YJC-4拮抗菌对烟草黑胫病的相对抑菌率分别达到91.80%、85.34%和72.99%,除有明显的抑菌圈外,黑胫病菌丝边缘处均有明显的溶解现象,抑制菌丝的正常生长和扩展,表明3种拮抗菌具有显著的抑菌效果。通过牛津杯法,XCS007拮抗菌粗提物的抑菌效果最为明显,YBM-4和YJC-4拮抗菌粗提物有一定的抑菌作用。2.研究发现,XCS007拮抗菌的最适生长温度为30℃,最适pH为7.5,最适培养时间为48h。YBM-4拮抗菌,在32.5℃,pH=7.5条件下,培养60 h,菌株生物量最高。YJC-4拮抗菌最适生长温度为35℃,该温度下培养60 h生物量最大,当初始pH=4.5时菌落几乎不生长。3.XCS007为革兰氏阴性菌,具有运动性,明胶液化明显,产生氧化酶、亚硝酸盐和N2,可以利用柠檬酸盐和分解葡萄糖;V-P和甲基红试验显阴性,不能利用果聚糖和淀粉。当钠盐浓度在3%时,最大生长量为2.11×108 cfu/mL。综合菌株的形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析结果,鉴定XCS007为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa。YBM-4为革兰氏阳性菌,V-P测验和甲基红试验显阳性,能利用柠檬酸盐,水解淀粉、葡萄糖,产生亚硝酸盐和N2;氧化酶和明胶液化显阴性,不分解果聚糖。随着钠盐浓度的增加,拮抗菌的生长和繁殖受到明显的抑制。YBM-4与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis（KT985478.1）的序列相似性为99%,故YBM-4鉴定为枯草芽孢杆菌。YJC-4为革兰氏阳性菌,在氧化酶、V-P和甲基红检验中显阳性,可以利用柠檬酸盐,分解葡萄糖、果聚糖,产生大量亚硝酸盐和N2;明胶液化显阴性,不能水解淀粉。在2%氯化钠的培养基中,拮抗菌生长量最大,为2.21×109 cfu/mL。YJC-4与沙福芽孢杆菌Bacillus safensis（JF411315.1）的序列相似性为99%,鉴定YJC-4为沙福芽孢杆菌。4.XCS007拮抗菌产生的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性呈现“先增加后减少”的总体趋势。当拮抗菌培养5 d时,几丁质酶活性最高,为1.23 U/mL,当培养6 d时,β-1,3-葡聚糖酶活性最高,1.96 U/mL。YJC-4拮抗菌产几丁质酶,在第6 d时,酶活性最高为0.67 U/mL,在第4 d时,β-1,3-葡聚糖酶活性最高为0.88 U/mL。YBM-4拮抗菌的β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性接近零。5.盆栽试验中,施药后第7 d,7组处理对烟草黑胫病均呈现显著的抑制效果。14 d时,XCS007及其粗提物、YBM-4、YJC-4和XCS007+YBM-4+YJC-4混剂（比例1:1:1）五个处理的防效分别为77.27%、75.78%、73.03%、78.94%和80.41%。AUDPC分别为75.87、80.65、88.59、72.01、66.98。表明3种拮抗菌混合后,可显著增强对烟草黑胫病的防效,有效延缓和控制烟草黑胫病的危害与扩展。大田试验中,在施药后第10 d、20 d、30 d进行3次调查发现,58%甲霜·锰锌的防效最佳,其次为XCS007+YBM-4+YJC-4处理,表明拮抗菌混合剂具有潜在的应用和推广价值。