α地中海贫血（α-thalassemia，简称α地贫）是由于α珠蛋白基因缺失（缺失型）或点突变（非缺失型）导致α珠蛋白肽链合成减少或缺失而引起的一种溶血性贫血，呈常染色体隐性遗传。我国最常见的3种缺失型突变为--SEA、-α^3.7和-α^4.2，最常见的3种非缺失型突变为Hb Constant Spring （Hb CS）、Hb Quong Sze（Hb QS）和HbWestmead（Hb WS）。血红蛋白Bart’s水肿胎无法存活，临床上出生后最为严重的α地贫类型是血红蛋白H病（Hb H病）。Hb H病可分为缺失型Hb H病和非缺失型HbH病，而非缺失型Hb H病的临床症状往往重于缺失型Hb H病。因此在产前诊断中需特别注意避免漏诊非缺失型Hb H病。目前血红蛋白毛细管电泳技术能够筛查HbCS，但无法筛查Hb QS和Hb WS。对于单纯的α地贫点突变携带者，临床上多无症状，且血常规及血红蛋白分析多无异常，因此在地贫筛查时很容易漏诊（除外Hb CS）。在产前筛查时，若夫妇一方为α⁰地贫，则另一方就有必要进行点突变检测。目前用于检测非缺失型α地贫的方法主要有反向斑点杂交、等位基因特异性PCR及测序等，但这些方法均存在一定局限性。本研究将高分辨熔解曲线分析技术（high resolutionmelting, HRM）用于检测中国人群常见3种α地贫点突变，并探讨其临床应用价值。一、目的应用高分辨熔解曲线分析技术检测中国人群常见3种α地贫点突变：Hb ConstantSpring （Hb CS）、Hb Quong Sze（Hb QS）和Hb Westmead（Hb WS），以建立一种简便快捷、成本低廉、准确可靠、高通量的分子筛查方法。二、方法1.样本采集：收集2008年12月至2011年10月基因型已知的α地贫点突变携带者样本81例，均经跨越断裂点聚合酶链反应（gap-polymerase chain reaction，gap-PCR）、反向点杂交（reverse dot blot，RDB）和DNA测序检测。其中男性34例，女性44例，年龄范围为4天-50岁，另外还包括3例产前诊断样本（羊水、绒毛、脐血各1例）。另收集2011年6月至2011年9月的正常健康人样本14例，其中男性5例，女性9例，年龄范围为22岁-48岁。正常对照样本经测序验证不含α （α₁和α₂）珠蛋白基因点突变。所有样本均来自广州市妇女儿童医疗中心产前诊断中心。2. PCR扩增：采用LightScanner Primer Design软件（美国Idaho Technology公司）设计1对引物同时扩增α1和α2珠蛋白基因第3外显子，扩增区域覆盖Hb CS、Hb QS和Hb WS点突变。建立并优化PCR反应体系。3. HRM分析：PCR扩增完成后采用LightScanner96（美国Idaho Technology公司）进行HRM分析，应用LightScanner Software with Call-IT2.0软件分析结果。三、结果经HRM分析显示出5种类型的熔解曲线：（1）Hb QS(α^QSα/αα)；（2）Hb QS合并--SEA或-α4(.2α^QSα/--SEA、α^QSα/-α^4.2)；（3）Hb CS及Hb CS合并缺失型突变(α^CSα/αα、α^CSα/--SEA、α^CSα/-α^4.2、α^CSα/-α^3.7)；（4）Hb WS及Hb WS合并--SEA或-α^3.7(α^WSα/αα，α^WSα/--SEA，α^WSα/--α^3.7)；（5）健康对照组（αα/αα）。所有α地贫点突变样本均可与正常对照正确区分，且Hb QS与Hb QS合并缺失型突变可相互区分。采用HRM筛查Hb CS、Hb QS及Hb WS的灵敏度和特异性为100%。四、结论HRM分析技术是一种简单、准确、快速、高通量、低成本的遗传学分析方法，可作为中国人群常见三种α地贫点突变筛查的优选方法。β地中海贫血（β-thalassemia，简称β地贫）是世界范围内最常见的单基因疾病之一，是由β珠蛋白基因（hemoglobin beta，HBB）突变导致β珠蛋白合成障碍而引起的一种溶血性贫血，呈常染色体隐性遗传。至今已发现200多种β地贫突变，其中CDs41-42-TCTT、IVS2-654C>T、-28A>G、CD17A>T及CDs71-72+A五种突变占所有突变类型的90%以上。重型β地贫患儿出生后需要定期输血治疗，除非实施造血干细胞移植成功，大部分患儿将于青少年夭折。由于目前对该病尚无理想的根治方法，因此通过产前诊断阻止重症患儿出生是防治β地贫的首选措施。目前国内外检测β地贫基因突变的方法主要有等位基因特异性PCR、反向点杂交、变性高效液相色谱等。本研究应用高分辨熔解曲线（High Resolution Melting，HRM）分析技术检测中国人群常见β地贫突变，并探讨其临床应用价值。一、目的应用高分辨熔解曲线分析技术检测中国人常见β地贫基因突变，以建立一种简便快捷、成本低廉、准确可靠、高通量的分子筛查方法。并探讨该方法在β地贫产前诊断中的应用价值。二、方法1.样本采集：收集广州市妇女儿童医疗中心产前诊断中心30对β地中海贫血高危夫妇及其产前诊断胎儿的DNA样本，其基因型已经过反向点杂交及测序鉴定，均为已知，共包括11种常见的β地贫突变：-29A>G，-28A>G，CDs14-15+G，CD17A>T，CD26G>A，CDs27-28+C，IVS1-1G>T，CDs41-42-TCTT，CD43G>T，CDs71-72+A，IVS2-654C>T。30例产前诊断样本中包括绒毛13例、羊水16例、脐血1例。另收集3例正常对照样本，且经测序验证不含HBB基因突变。2. PCR扩增：采用LightScanner Primer Design软件设计4对引物分别扩增HBB基因的第1、2外显子及第2内含子部分区域（涵盖IVS2-654C>T突变），建立并优化PCR反应体系。3. HRM分析：PCR扩增完成后采用LightScanner96（美国Idaho Technology公司）进行HRM分析，应用LightScanner Software with Call-IT2.0软件分析结果。三、结果胎儿的基因型通过与其父母（阳性对照）及正常对照的熔解曲线相比对进行鉴定。这30例胎儿中，10例诊断为重型β地贫患者，11例诊断为轻型β地贫携带者，9例诊断为正常。在本研究中，HRM分析与RDB及DNA测序结果的完全一致，未出现假阳性及假阴性结果，灵敏度与特异性均为100%四、结论HRM分析技术是一种有效、准确的检测方法，可用于父母基因型已知的β地中海贫血的快速产前诊断。