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背景:MicroRNAs(miRNA)是一类参与细胞发育、细胞分化、细胞凋亡、细胞增殖以及肿瘤发生的调节分子家族。miRNA与其靶mRNA在RISC中产生相互作用。miRNA与mRNA3端非翻译区(3UTR)的碱基配对方式是序列特异性的,因此与成熟miRNA有互补序列的寡核苷酸链也具有miRNA转录剪切和表达沉默的功能。miRNA可以通过序列匹配作用于众多的靶mRNA分子,干扰他们的稳定性及相关的蛋白翻译。因此,一个重要miRNA功能缺失,将导致大量靶mRNA改变,进而影响细胞功能乃至机体整体的调节平衡。已有文献报道mRNA的3UTR可以通过碱基配对的方式来调节细胞质中的miRNA的活动,因此,具有与靶mRNAYUTR相似序列的寡核苷酸链也可作为诱饵寡核苷酸,竞争性的与相应的成熟miRNA结合。由此可以预测,诱饵RNA分子能够作为外源竞争RNA(cRNA)靶向作用于成熟miRNA,并选择性的保护相应的mRNAs。 目的:我们通过系统的研究来评估合成的诱饵寡核苷酸对hsa-mir-223活动的选择性靶向作用,并将包含与成熟miR-223及靶mRNA3UTR序列碱基配对位点的诱饵寡核苷酸用于检测对miR-223活性的反向作用。 方法:根据成熟miR-22序列及其靶mRNA序列,利用在线演算法分析,设计并合成寡核苷酸诱饵。利用双荧光素酶试验通过分别包含IGF1R,FOXO1,POLR3G,FOXO3,CDC27,FBXW7及PAXIP1等靶mRNA3端非编码区(即3UTR)的荧光素酶报告质粒中荧光素酶活性的变化来评估合成寡核苷酸诱饵对hsa-mir-223活性的影响。分别利用实时定量PCR与蛋白印迹用来测量诱饵寡核苷酸对miR-223靶向mRNA的表达水平的影响。利用CCK-8,MTT,酸性磷酸酶活性测定,集落形成实验,肿瘤细胞粘附到胶原的实验以及Hoechst染色等分别用于检测寡核苷酸诱饵对miR-223参与的细胞生长、增殖、粘附及凋亡等生物功能的影响。 结果:除了与成熟miR-223全长互补的反义寡核苷酸,分别与成熟miR-2235端,3端或中间序列互补的诱饵寡核苷酸均抑制miR-223对IGF1R,FOXO1,FOXO3,CDC27,POLR3G,FBXW7等靶mRNA3UTR的作用,并不同程度的挽救了miR-223所抑制的上述靶mRNA在mRNA和蛋白表达水平。因为PAXIP1不是miR-223的靶点,所以所有诱饵寡核苷酸对其均没有影响。基于IGF1R3UTR所设计的诱饵寡核苷酸1是除外与成熟miR-223全长互补的反义寡核苷酸诱饵4,恢复IGF1R表达最明显的寡核苷酸诱饵。对于具有与IGF1R3UTR类似的与miR-223结合位点的FOXO3和POLR3G,诱饵1也表现出了显著的挽救效应;而诱饵1未能恢复Sp1,CDC27和FBXW7的表达。 结论:本研究实验数据表明具有特异性序列的诱饵寡核苷酸可以作为竞争性外源RNA选择性的抑制miRNA对靶mRNA的作用。筛选并鉴别对miRNA靶向作用具有选择性抑制作用的诱饵寡核苷酸对未来临床的靶向治疗具有重要意义和应用前景。