梨褪绿叶斑伴随病毒（Pear ted virus,PCLSaV）是本研究室在梨树上发现的一种Emaravirus属的病毒,基因组由5条负义单链RNA构成,前期本研究室制备了抗PCLSaV核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein,NP）的多克隆抗体,本研究在此基础上,分析所制备的抗体用于梨样品中PCLSaV的血清学检测效果,同时采用RNA测序（RNA-seq）技术对表现PCLSaV症状的梨样品和无症状梨样品中该病毒的含量进行了分析,并在田间调查的基础上,鉴定明确梨瘿螨可有效传播该病毒。结果为该梨病毒病诊断提供了快速和可靠的血清学检测技术,同时为建立科学的取样方法和该病毒病防控提供重要信息。主要研究结果如下:1.采用PCLSaV NP蛋白制备的多克隆抗体对提取的病毒粒子进行Western blot分析,多克隆抗体与30.2 kDa的特异性表达蛋白NP出现免疫反应,制备的PCLSaV NP的多克隆抗体特异性较好;该多克隆抗体能与感染PCLSaV的梨叶片中的NP蛋白发生特异性反应,不与感染ASPV和ASGV的梨病叶,以及健康的杜梨、考密斯和A20发生免疫反应;采用Dot-ELISA检测PCLSaV的多克隆抗体最佳稀释浓度为1:400倍稀释（w/v,g/mL）,按1:5倍稀释（w/v,g/mL）梨叶片粗提液,该方法可有效检测样品中的PCLSaV,采用Dot-ELISA和巢式RT-PCR对100份梨样品进行了该病毒检测,Dot-ELISA的检出率为34%,巢式RT-PCR的检出率为47%,Dot-ELISA检测效果低于巢式RT-PCR。2.选取同一果园中PCLSaV发病梨植株和未发病梨植株各3株,从发病植株上各采集显症状和不显症状的梨叶片样品2份,同时从未发病梨植株上各取2份样品进行RNA测序,并对测序获得的匹配到PCLSaV基因组的read和contig进行分析,发现显症梨样品中匹配到PCLSaV基因组链的read数量多且覆盖率高,而同株的不显症梨样品所得到的read很少且覆盖率很低;来自3株未发病梨植株的样品中,其中1株梨植株上的两份样品匹配到的PCLSaV的read数量相对较多,另外两株上的4份样品匹配到的PCLSaV的read很少。测序结果表明该病毒病在叶片上的症状表现可能与该病毒含量正相关,未发病的梨植株中也存在潜伏侵染。3.田间调查发现,在PCLSaV发生严重的梨园中,瘿螨密度较高,在体视显微镜和扫描电镜下对梨叶片上发生的瘿螨进行了形态学观察,发现该瘿螨具瘿螨属（Eriophys）的典型特征。从表现PCLSaV症状的梨叶片上取瘿螨,接至健康的杜梨实生苗叶片上,分别于接瘿螨30 d和60 d后采用RT-PCR和巢式RT-PCR检测杜梨接种叶和新生嫩叶中的PCLSaV,结果表明,瘿螨可以传染该病毒,PCLSaV在接种叶片和嫩叶中的检出率分别为80%和60%。