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中药在中医理论的指导下发挥着治疗作用,对中药药效物质的提取纯化及阐明其复杂作用机制一直是研究的热点和难点。随着科研思维的拓展和技术的创新,拥有“预定性、高度识别性、实用性”特色的分子印迹技术实现了对中药有效成分的分离、纯化与富集,而随着大数据时代的到来,网络药理学的运用为阐明中药“多成分、多靶点”的作用机制提供了理论依据。本文将通过沉淀聚合法制备丹参酮IIA分子印迹聚合物并将印迹聚合物用于丹参的血清药物化学研究,并运用网络药理学探讨枣仁安神方治疗失眠的可能作用机制。具体工作内容如下:1.将丹参酮IIA(Tanshinone IIA)、甲基丙烯酸(Methacrylic acid,MAA)、乙二醇二甲基丙烯酸酯(Ethylene glycol dimethacrylate,EGDMA)和偶氮二异丁腈(2,2-azobisisobutyronitrile,AIBN)分别作为反应的模板分子、功能单体、交联剂与引发剂,聚合获得丹参酮IIA分子印迹聚合物。得到的丹参酮IIA分子印迹聚合物在场发射扫描电子显微镜下观察,发现其单分散性好,且粒径均匀。动态吸附试验、静态吸附试验、选择性吸附试验显示丹参酮IIA分子印迹聚合物约3小时达到吸附平衡,最大吸附量为34.09μmol/g,且对丹参酮IIA有特异的选择性。通过分子印迹聚合物联用固相萃取法(Molecularly imprinted polymers-solid phase extract,MIP_S-SPE)的方法实现了对丹参酮类化合物在血清中代谢产物的高效分离与灵敏检测。2.枣仁安神方(Zaoren anshen prescription,ZRASP)由酸枣仁、丹参、五味子组成,是治疗失眠的常用中成药方剂。在枣仁安神方的网络药理学研究中,通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)和中国天然产物化学成分库收集ZRASP潜在活性成分。通过TCMSP和中草药成分靶标数据库(Herbal ingredients’targets database,HIT)获得ZRASP潜在活性成分的靶点。通过治疗靶标数据库(Therapeutic target database,TTD)、Drug Bank、人类孟德尔遗传数据库数据库(Online Mendelian inheritance in man,OMIM)、毒性与基因比较数据库(Comparative toxicogenomics database,CTD)、人类基因数据库(Human gene database,Gene Cards)收集与失眠相关靶点信息。利用“Venny 2.1”工具对ZRASP中潜在活性成分的靶点与失眠相关靶点进行映射,获得ZRASP治疗失眠的靶点。利用Cytoscape软件绘制“活性成分-作用靶点”网络图,并通过STRING、Dis Ge NET数据库分别获得ZRASP治疗失眠靶点的蛋白质相互作用关系和作用靶点的类型。利用Cluster Profiler对靶点进行基因本体论(Gene ontology,GO)富集分析,通过Cytoscape中的Clue GO与Clue Pedia对靶点进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路分析。网络药理学结果显示ZRASP中有67个主要活性成分,73个靶点参与治疗失眠。靶点多属于受体、酶、信号分子等物质,在神经递质受体活性、G蛋白偶联胺受体活性、铵离子结合有较高的GO富集,有47条显著性KEGG通路。