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第一部分：自噬在大鼠移植肺缺血再灌注中的表达 目的： 建立大鼠左肺原位移植模型，观察自噬在肺移植（Lung Transplantation，LT）缺血再灌注损伤（Ischemia Reperfusion Injury，IRI）中的表达，并观察自噬表达水平随再灌注时间的延长而发生的变化。 方法： 采用―改良三袖套吻合法‖建立大鼠原位左肺移植模型，将SD大鼠随机分为5组（每组6只）：假手术组（S组）、移植再灌注2h组（Y2组）、移植再灌注6h组（Y6组）、移植再灌注12h组（Y12组）、移植再灌注24h组（Y24组）。S组术后2h，其余各组于再灌注后相应时间点取材，分别做以下检测：①透射电镜观察自噬体在各组肺组织中的表达。②免疫荧光技术检测自噬特异性标记物 LC3B的表达；③用 RT-PCR检测自噬相关基因 Beclin-1，Atg5的m RNA表达情况；④Western blot法检测自噬相关蛋白 Beclin-1，LC3B的表达情况。 结果： 1.形态学方面：①透射电镜：与S组相比，Y2组电镜下发现自噬体的存在；②免疫荧光检测：与S组相比，各移植组LC3B阳性细胞数进一步增多，以Y6组表达最多。 2.分子生物学方面：①RT-PCR检测：与S组相比，各移植组Beclin-1,Atg5的mRNA表达量均不同程度的增加（P<0.05），Y6组表达量明显高于其余各组（P<0.05）；②Western blot检测：与S组相比，各移植组Beclin-1，LC3B蛋白表达均不同程度的增加（P<0.05），Y6组表达量明显高于其余各组（P<0.05）。 结论： 1.肺移植再灌注后自噬表达被激活。 2.自噬在肺移植再灌注后2h即有表达，且随时间延长，表达强度先升高再降低，并于再灌注后6h达到高峰。 第二部分：自噬在大鼠移植肺缺血再灌注早期中的作用初探 目的： 通过药物抑制和激活自噬，观察自噬对肺移植缺血再灌注损伤的影响，初步探讨其在肺移植LIRI中的潜在作用机制。 方法： 将SD大鼠随机分为8组（每组6只）：假手术组（S组），假手术3-MA干预组（SM组），假手术BafilomycinA1干预组（SB组）,假手术Rapamycin干预组（SR组）,肺移植组（Y组），移植前3-MA干预组（M组），移植前BafilomycinA1干预组（B组）,移植前Rapamycin干预组（R组）。各假手术组关胸2h后取材检测，各移植组再灌注2h后取材检测：①各组肺组织细胞自噬的表达情况。（检测方法及指标同第一部分）②酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法测定各组肺组织中 IL-1β,IL-10,TNF-α含量；③采用双抗体夹心 ABC-ELISA法测定各组肺组织中 MDA，MPO含量；④各组左肺静脉血气（PaO2、PaCO2、SaO2）、肺内分流（Qs/Qt）等肺功能指标；⑤各组左肺湿干比（W/D）；⑥各组肺组织石蜡切片HE染色行病理学损伤程度评价。 结果： 1.与S组相比，SM组、SB组、SR病理学未见明显差异；肺功能指标，肺湿干比,炎症因子及氧化应激指标，Beclin-1，Atg5的m RNA表达，Beclin-1，LC3B的蛋白表达比较无统计学差异（P>0.05）. 2.与S组相比，移植各组病理学损伤加重，肺功能指标，炎症因子等指标差异显著（P<0.05），肺损伤加重，说明肺移植LIRI模型成功。LC3B荧光信号表达增加，Beclin-1，Atg5的m RNA表达量增加（P<0.05），Beclin-1，LC3B的蛋白表达增加（P<0.05），说明移植各组发生自噬。 3.与 Y组相比，M组、B组 PaO2、SpO2降低，PaCO2、Qs/Qt增高，W/D比值升高（P<0.05），MDA、MPO、IL-1β、TNF-α含量均升高，IL-10含量降低（P<0.05）；R组PaO2、SpO2升高，PaCO2、Qs/Qt降低，W/D比值降低（P<0.05），MDA、MPO、IL-1β、TNF-α含量均降低，IL-10含量升高（P<0.05）。 4.与Y组相比，M组和B组的LC3B荧光信号表达减弱，Beclin-1，Atg5的m RNA表达量减少（P<0.05），Beclin-1，LC3B的蛋白表达减少（P<0.05）；R组LC3B荧光信号表达增强，Beclin-1，Atg5的m RNA表达量增加（P<0.05），Beclin-1，LC3B的蛋白表达增加（P<0.05）。 结论： 1.三种实验剂量的自噬干预剂不会引起假手术组的自噬强度变化，也不会直接造成肺损伤。 2.给予自噬抑制剂3-MA及BafilomycinA1后，肺移植再灌注早期细胞自噬表达被明显抑制，同时LT后的LIRI进一步加重。 3.给予自噬激活剂Rapamycin后，肺移植再灌注早期细胞自噬表达更加明显，同时LT后的LIRI明显减轻。 4.抑制自噬后，肺组织炎症反应和氧化应激反应增强，移植肺LIRI加重；激活自噬后，肺组织炎症反应和氧化应激反应减弱，肺移植LIRI减轻，提示调节炎症反应和氧化应激反应可能是自噬改善肺移植LIRI的机制。干预自噬有可能成为治疗肺移植LIRI的一个全新研究方向。