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牙周组织再生是牙周病治疗学的重要课题,它的研究是在牙周组织细胞生物学基础上进行的。牙周组织引导性再生(GTR)是近年来在对牙周组织再生的组织细胞生物学较深入的研究基础上发展起来的。目前牙周GTR的研究还有许多问题有待解决,如牙周膜(PDL)细胞的骨样细胞特性在牙周GTR中的表达和作用;如何利用PDL细胞的生物学特性提高牙周GTR中组织的再生能力;牙周GTR材料的引导、诱导作用的结合以及符合牙周组织再生生物学基础的可降解GTR材料的研制等等。本实验的目的在于利用骨形成单白(BMP)的生物学特性对PDL细胞的骨样细胞特性进行深入研究并观察PDL细胞对BMP的生物学反应,研究PDL细胞中是否存在BMP的靶细胞,并在此基础上将BMP和牙周GTR的应用结合起来,研究BMP在牙周GTR中应用的可行性,并对可降解GTR材料进行初步的研制,为今后的研究奠定基础。 一、骨形成蛋白(BMP)的提取和改进 利用文献所提供的提取方法,从小牛长骨中进行BMP的提取并在此基础上加以改进,使BMP的提取量提高到267mg/kg湿骨,并具有很高的活性;利用凝胶色谱和电泳技术对BMP进行了组分分离,分离出的蛋白带中含有分子量与国外报道相同的蛋白成分。 二、人PDL细胞、牙龈成纤维细胞(GF)的培养、生长特性和鉴定 采用组织块培养法进行细胞培养,两种组织来源同一个体。发现PDL细胞培养成功率(20%)低于GF(70%),不同组的细胞其细胞生长曲线不同,细胞倍增时间:PDL7、GF7分别为34.4h,25.3h;PDL5、GF5分别为27.0h、24.6h。提示在体外实验中对细胞的生长特性的观察和对细胞的筛选是必要的。对培养的细胞进行角蛋白和波丝蛋白抗体的免疫组化