慢性疼痛，尤其是癌性疼痛和顽固性疼痛一直是医疗界的一道难题。传统的镇痛药尚不能有效治疗慢性疼痛尤其癌痛。脑啡肽作为一种内源性阿片肽类镇痛药受到关注，用于许多动物实验已证明有明显的镇痛效应。将前脑啡肽原基因做为目的基因，利用逆病毒载体，经过包装细胞系的包装，产生的病毒可将前脑啡肽原基因整合到靶细胞NIH3T3细胞的基因组中，制造出可以分泌镇痛物质脑啡肽的工程化细胞系，利用人工大量获得。本实验采用pLNCX2载体，其中5′LTR（包括病毒启动子／增强序列）可控制neo^r基因的表达，用于真核细胞中抗生素筛选。目的基因可克隆进多克隆位点，在P_CMVIE控制下表达。pLNCX₂含有包装信号Ψ序列，但没有gag、pol和env等编码病毒结构蛋白的基因，须通过包装细胞系（PT67等）的包装。因此，当转染细胞增殖传代时，其形成复制完整病毒能力的的机会极少。其包装产生的病毒，携带前脑啡肽源基因，可作为疼痛基因治疗的实验研究的有力工具。 目的 研究利用RT-PCR技术，可否获得人前脑啡肽原基因，并采用pLNCX2逆转录病毒载体，将外源性脑啡肽基因导入并整合到靶细胞NIH3T3细胞的基因组中，观察是否有外源性脑啡肽基因的表达，探讨一条有效的治疗疼痛的转基因方法。 方法 1．RT-PCR 根据GenBank报道的人脑啡肽基因序列（NM₀06211），设计引物，其引物5’与3’端分别加上HindⅢ和NotⅠ酶切位点，以便目的基因插入逆转录病毒载体。提取人脑组织总RNA，然后反转录得到包含前脑啡肽原基因的单链总cDNA，