目的:首先通过体外实验探讨极光激酶A(aurora kinase A,AURKA)抑制剂Alisertib与乐伐替尼联合作用对人肝癌细胞株形态学改变、增殖、克隆形成、迁移、细胞周期、凋亡及DNA损伤的影响及分子机制。通过体内实验验证联合用药对肝癌细胞的抗增殖情况和促凋亡效应。方法:人肝癌细胞分别经不同浓度的Alisertib、乐伐替尼、Alisertib+乐伐替尼作用48h后,采用倒置荧光显微镜观察细胞的形态学变化;利用CCK-8法检测细胞存活率;利用克隆形成实验检测肝癌细胞增殖能力的改变;利用划痕愈合实验研究肝癌细胞迁移侵袭能力的改变;利用流式细胞术和免疫荧光成像检测细胞周期和细胞凋亡的情况;利用westernblot实验来检测DNA损伤等相关蛋白的表达水平;利用激光共聚焦成像检测foci灶点来代表DNA损伤应答情况。通过建立裸鼠皮下成瘤模型,进行测量瘤体大小、分析裸鼠体重变化和进行免疫组化、TUNEL凋亡荧光分子探针检测等相关体内实验,从而验证体外实验结果。结果:1、与对照组和单药组相比,我们在多种人肝癌细胞系中观察到Alisertib和乐伐替尼联合应用使细胞形态发生显著改变,有明显毒性作用,并且增强了对细胞增殖和迁移愈合的抑制作用。单独应用Alisertib或与乐伐替尼联合应用48小时后,对细胞周期进行分析,结果显示G2期细胞百分比显著增加,G2/M期阻滞。在Alisertib和乐伐替尼联合应用的肝癌细胞中观察到了不连续的纺锤体和染色体错位。Westernblot和免疫荧光成像相关结果显示:与对照组和单药组相比,Alisertib和乐伐替尼联合应用可下调DNA损伤修复通路的蛋白表达水平。2、与单药治疗相比,利用Hep G2肝癌细胞系建立的异种移植瘤模型实验结果显示:Alisertib和乐伐替尼联合应用具有更优秀的抗肿瘤效果。结论:1、Alisertib和乐伐替尼联合应用,可以明显改变肝癌细胞形态,有效抑制肝癌细胞的增殖、迁移愈合能力,诱导细胞周期发生阻滞,促进细胞凋亡,激活DNA损伤修复的相关信号通路。2、Alisertib和乐伐替尼联合应用能明显抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤的生长,诱导移植瘤细胞凋亡,提示该联合药物治疗方案为肝癌患者提供了新的潜在治疗方向。