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随着人们健康意识的提高和科学的发展,食药用真菌作为一类既美味可口又具有保健功能的真菌类食品受到了人们的广泛欢迎。猴头作为我国传统的山珍,其营养物质全面且药用价值高,因此显得更加珍贵。
本项研究的主要目的是通过诱变育种筛选出适宜发酵培养,液体发酵菌丝体收率高于原菌种的优良菌株,对其发酵条件和培养基配方进行优化,以提高菌丝收率,降低生产成本。并且对高产菌株基因组DNA进行提取,同时进行产麦角甾醇关键酶基因的克隆,以便对此基因进行进一步的研究。
首先对猴头菌的原生质体制备条件进行了研究,确定猴头菌原生质体制备的最佳条件为:用PDP液体培养基25℃摇床培养4d后,再用PDP培养基静止培养72h,然后用0.6mol/L氯化钾配制含1%纤维素酶和0.5%蜗牛酶的复合酶,按每300mg加1mL酶液计算,在pH5.5温度为30℃条件下酶解3h,原生质体制备率可达到4.85×106个/mL。
对猴头菌菌株H1的原生质体进行紫外诱变,经过初筛、复筛、以及精筛筛选出H8、H39、H65三株发酵菌丝体收率较高的菌株,并通过拮抗试验和遗传稳定性试验保留了菌株H65做为高产菌株,它的菌丝体收率达到19.610g/L,比出发菌株高了23%。
对菌株H65的发酵培养基配方研究表明,最佳发酵培养基配方为:葡萄糖1.5%、玉米粉2.0%、酵母膏1.0%、蛋白胨1.5%、MgSO4·7H2O0.15%、KH2PO40.05%。
菌株H65的发酵条件研究结果表明,菌株H65的最佳培养条件为:装液量100mL/500mL,接种量8%,起始pH5.5,最适种龄为96h,最适培养温度为25℃,最适摇床转速为150r/min,培养时间为7d。
菌株H65的基因组DNA在用传统的DNA提取方法提取时,能够产生白色沉淀,琼脂糖凝胶电泳显示亮度很高的条带。证明此方法适用于猴头菌基因组DNA的提取。