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枯草芽孢杆菌是存在于土壤和植物生态环境中的优势菌群之一,有些对对植物的病原菌具有一定程度的抑制作用。本实验室从田间土壤中分离到一株具有广谱抑菌活性的菌株,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) B99-2。通过抑菌试验表明,B99-2对Fusarium oxysporum、Rhizoctonia solani、Cladosporium fulvum、Botrytis cinerea、Colletotrichum orbiculare等常见的病原真菌均有良好的抑制作用,是1株具有较好应用潜力的生防菌。为了给生防菌B99-2的产业化应用提供技术和基础,本研究对生防菌B99-2摇瓶培养基成分进行优化,从12种常见碳源,10种常见氮源中筛选出对生防菌B99-2发酵液菌含量和芽孢形成都较佳作用的玉米粉、黄豆粉；筛选出了对芽孢形成有促进作用的CaCO3;通过培养基中添加速效氮源KN03,显著提高了菌含量。采用响应面设计对摇瓶发酵条件进行了优化,优化后的发酵培养基为：玉米粉24.24g/L,KN03 6.99 g/L,黄豆粉26.09 g/L, MgSO4 5.00 g/L, MnSO4 18 mg/L, KH2PO4 0.3 g/L, K2HPO4 2.0 g/L, CaCO34.2 g/L。在此优化培养基下,生防菌B99-2发酵液菌含量达到7.23×109cfu/mL,比响应面优化前的5.90×109cfu/mL提高了22.54%。利用摇瓶上优化的参数在150 L发酵罐上进行放大试验,发酵液菌含量高达2.05×1010cfu/mL,形成80%芽孢率的时间比摇瓶条件下提前18 h。对生防菌B99-2可湿性粉剂的载体(填料),润湿剂,悬浮(分散)剂,稳定剂,紫外保护剂等助剂进行筛选,确定最佳配方为硅藻土10%,PVA 7.2%,D4254.8%,羧甲基纤维素钠2%,羧甲基纤维素0.1%,产品各项指标均达到国家标准。通过筛选获得微胶囊化效果较佳、较低的麦芽糊精作为壁材,对喷雾干燥条件进行优化,获得喷雾干燥法制备生防菌B99-2微胶囊制剂的最佳工艺为：菌浆3%,麦芽糊精20%,复合乳化剂HLB值13,乳化剂0.4%,乳化转速600r/min,进风温度170℃,进液流量400 mL/h。采用该工艺,生防菌B99-2微胶囊制剂的菌含量达到4.05×109cfu/g。并且该微胶囊制剂具有较高的耐贮性和抗紫外线能力。