黄颡鱼是我国重要的小型经济鱼类,它具有无肌间刺、肉质细嫩、肉味鲜美、营养价值高等优点。但是黄颡鱼个体较小,生长速度较慢,这使其养殖业的发展受到了一定程度的限制。诸多学者的相关研究表明,多倍体鱼尤其是三倍体鱼在多种鱼类中可能表现出比二倍体更符合人们养殖需要的生长和繁殖性状,其正在成为鱼类育种、鱼类性状改良等方面研究的目标。同样基于这种期望,多年来,本课题组一直致力于黄颡鱼多倍体育种工作,现将近期所做的主要工作以及取得的主要成果介绍如下:1.采用冷休克诱导三倍体的方法,单因素试验设计诱导起始时间(TA)以1min为梯度,1～6min范围取值,处理温度(T)以3℃为梯度,0～12℃范围取值,持续时间(D)以5min为梯度,5～50min范围取值,综合考虑原肠期成活率、孵化率、畸形率、非整倍体率、三倍体诱导率以及幼鱼时期三倍体的检出率等指标得出:受精后2min,5℃,处理20min的诱导优化参数,其胚胎时期的三倍体诱导率高达70%;正交试验设计TA取值1、2、3min,T取值4、5、6℃,D取值15、20、25min,得出的优化诱导参数与单因素试验设计一致,三倍体诱导率相近,并且幼鱼时期三倍体(含嵌合体)的检出率为25%。正交分析表明,起始休克时间是原肠期三倍化率和孵化率的重要影响因子,冷休克条件下温度对畸形个体的产生有重要影响。2.热休克正交试验中设定TA为1、2、3min,T为38、40、42℃,D为1、2、3min,结果表明受精后2min,40℃处理2min的条件下,胚胎时期三倍体诱导率近60%,幼鱼时期三倍体检.出率达40%～50%,非整倍体发生率较低,为诱导操作的优化指标。分析得出:参考三倍体率、畸形率、孵化期相对存活率三者而言,休克温度均是重要因素,次之为起始休克时间,以及持续时间。3.冷、热休克两种诱导方法比较得出:冷休克处理组中早期的诱导率较高,但各期成活率较低,畸形个体较多,说明此法对胚胎的刺激较大,同时可能影响到后期成活率,幼鱼时期的成活率和倍性检出率明显较低。热休克处理法总体上优于冷休克处理法。4.本试验择优选取的幼鱼尾鳍短期培养条件为:以AIM培养液对培养组织灭菌,添加生长因子30℃进行短期培养;择优选取的培养细胞染色体制片条件为:0.5μg/mL秋水仙素处理2～3h后,用0.075 M KCl低渗40min。实验证明采用幼鱼尾鳍细胞短期培养的方法为制备染色体提供材料,能够以对鱼体最小的损伤获得高质量的图片,同时能够给工作者以宽裕的时间、充分的材料进行深入的研究。5.以鳍组织或血细胞为样品采用流式细胞仪进行倍性鉴定的结果与染色体计数法所得一致,都能准确的检测出鱼体的倍性,但是以鳍组织为样品所得直方图主峰较宽,CV值较大,相比之下,血细胞样品离散型好,操作方便,所得效果较好,所需样品用量也较少。6.诱导处理组在胚胎发育时期发现了单倍体和非整倍体,但在幼鱼时期未检测到,说明单倍体和非整倍体可能只是在胚胎期前后暂时存在,不能发育成真正的个体,只是休克诱导效应的副产物,至于存活的嵌合体能否生长下去仍待研究。