【摘 要】
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目的:将骨髓基质干细胞(BMSCs)定向诱导分化成为肝细胞,进行细胞移植,以替代损伤的肝细胞,对肝病治疗有非常重要的临床价值。然而,干细胞向肝细胞分化的机理尚不清楚。本实验
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目的:将骨髓基质干细胞(BMSCs)定向诱导分化成为肝细胞,进行细胞移植,以替代损伤的肝细胞,对肝病治疗有非常重要的临床价值。然而,干细胞向肝细胞分化的机理尚不清楚。本实验研究小鼠BMSCs向肝细胞定向分化过程中Ca2+的变化。方法:无菌分离小鼠BMSCs,贴壁法纯化和扩增BMSCs。应用添加肝组织提取液(G)和鼠源β-神经生长因子(β-NGF)方案诱导BMSCs向肝细胞分化,镜下观察分化细胞的形态特征;免疫细胞化学染色法检测肝细胞的特异性标志物a-1-抗胰蛋白酶(AAT)和白蛋白(ALB)表达;吲哚靛青绿(ICG)摄取实验鉴定肝样分化细胞的离子转运功能。应用流式细胞技术对比检测BMSCs和β-NGF诱导分化细胞内的游离[Ca2+]i;并观察钙离子拮抗剂尼莫地平对干细胞的增殖和定向分化能力的影响。实验结果:(1)肝组织提取液和β-NGF诱导后,可见分化细胞逐渐趋短变圆呈圆形和卵圆形,圆形细胞可以摄取吲哚靛青绿(ICG),呈现绿色。免疫细胞化学染色显示分化细胞呈AAT和ALB阳性表达;诱导组分化细胞的AAT表达显著性高于对照组(P<0.05);肝组织提取液和β-NGF组间的诱导作用无显著性差异(P>0.05)。(2) β-NGF诱导形成的肝样分化细胞中[Ca2+]i较对照组细胞显著性升高(P<0.05)。(3)加入钙离子拮抗剂尼莫地平可以阻断BMSCs向肝细胞的诱导分化,并影响细胞的增殖活性。实验结论:(1)肝组织提取液和β-NGF均可诱导BMSCs向肝样细胞分化。(2)Ca2+在BMSCs的增殖和向肝细胞的分化过程中发挥重要的作用。
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