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三价铬作为葡萄糖耐量因子(Glucose tolerance factor, GTF)的组分,是机体必需的微量元素,它与碳水化合物、脂肪和蛋白质等物质的代谢相关。它的缺乏影响碳水化合物代谢,引起高血糖、高血脂等症状,而补充三价铬可以缓解这些病症。它通过促进脂肪的消耗进而降低机体体脂含量,从细胞生物学角度说,它抑制肥胖的途径主要是影响前体脂肪细胞增殖,促进前体脂肪细胞凋亡,抑制前体脂肪细胞分化,减少胞内脂肪合成,增加脂解等。成熟的脂肪细胞属于终末期分化细胞,没有增殖分化能力,所以脂肪细胞增殖分化的研究很难在体内进行。来源于3T3细胞克隆分离得到的3T3-L1细胞系,能连续传代,它从有丝分裂汇合到接触性抑制和克隆性增生的过程,细胞状态经历了前体脂肪细胞到成熟脂肪细胞的转变,因此对体内脂肪细胞增殖分化的研究多采用3T3-L1细胞作为研究模型。
本课题主要研究葡萄糖酸铬(Chromium Gluconate,CrGlu)和吡啶羧酸铬(ChromiumPicolinate,CrPic)对3T3-L1细胞增殖分化的影响,采用WST-1法观察细胞生长抑制并确定半数抑制浓度(IC50),LDH(Lactate dehydrogenase)法评价CrGlu和CrPic引起的细胞膜损伤,Hoechst染色法观察凋亡细胞的形态学特征,流式细胞计法测定细胞凋亡,并且测定了不同浓度的三价铬对3T3-L1脂肪细胞内脂质(TG)沉积效率的影响,同时也对相关基因进行了初步研究。通过以上实验方法比较不同配体的三价铬生理活性差异,为其应用提供理论支持。
通过本课题得到了以下结果:
1.在CrGlu浓度为50~200μmol/L,处理时间为24~72 h范围内,可以明显抑制3T3-L1脂肪细胞的增殖,抑制效果随CrGlu浓度和处理时间增强,并可诱导细胞产生凋亡;同时还发现200μmol/L CrGlu和CrPic相比,具有更高的抑制3T3-L1脂肪细胞增殖的活性。
2.100~200μmol/L CrGlu可以显著抑制3T3-L1脂肪细胞分化,并且减少细胞内TG的积聚,能够促进细胞内TG的降解,并且随着CrGlu浓度的提高,其生理活性越强;低浓度(10~50μmol/L) CrGlu对3T3-L1脂肪细胞分化无明显影响。同时还发现200μmol/L CrGlu和CrPic相比,具有更高的抑制3T3-L1脂肪细胞分化的活性。
3.三价铬能够抑制PPARγ、C/EBPα的活性,同时下调PPARγ、C/EBPα和蛋白表达,高浓度三价铬抑制作用更强烈;且200μmol/L CrGlu和CrPic相比,对这种抑制和下调作用作用更强。研究还发现低浓度(10~50μmol/L)CrGlu对PPARγ、C/EBPα表达量无明显影响(P<0.05)。
本课题可初步得到以下结论:三价铬对3T3-L1脂肪细胞增殖有抑制作用,并可诱导细胞产生凋亡。研究还证实高浓度CrGlu(100~200μmol/L)能够抑制脂肪细胞的分化,减少细胞内TG的积聚,同一浓度(200μmol/L)下,CrGlu与CrPic相比具有更高的抑制细胞内TG积累的效率。进一步的探讨表明在此过程中,能够明显抑制PPARγ、C/EBPα的表达。