目的:　　通过建立脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury，I/R)大鼠模型、氧糖剥夺/再灌注损伤（Oxygen-Glucose Deprivation/Reoxygenation，OGD/R）神经元模型，基于磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B，PKB，又称Akt)信号通路从体内外角度探讨、阐释栝楼桂枝颗粒减轻脑缺血损伤及抑制神经元凋亡的作用机制，为栝楼桂枝颗粒治疗缺血性脑卒中提供实验依椐。　　方法:　　第一部分 栝楼桂枝颗粒调控PI3K/Akt信号通路对I/R大鼠的保护作用　　实验一（栝楼桂枝颗粒对I/R大鼠的神经保护作用）:实验大鼠随机分为假手术组、脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)组、栝楼桂枝颗粒组，采用线栓阻塞脑中动脉法建立脑缺血再灌注损伤模型大鼠，各组灌胃给药后，采用改良神经评分法(modified neurological severity score，mNSS)评价法评价大鼠神经功能，采用网屏测验评价大鼠前爪抓握能力及肌力，采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色法和核磁共振成像(magnetic resonance imaging，MRI)检测大鼠脑梗死面积，采用尼氏染色法观察大鼠脑组织病理变化，采用透射电镜技术观察神经元细胞的超微结构变化，采用原位末端标记法(Terminal transferase dUTP nick end labeling，TUNEL)检测神经元的凋亡，同时采用免疫组化的方法检测神经元特异性指标NeuN、MAP-2及凋亡蛋白Bax、Bcl-2的蛋白表达情况。　　实验二（栝楼桂枝颗粒对I/R大鼠PI3K/Akt信号通路的影响）:实验大鼠随机分为假手术组、MCAO组、栝楼桂枝颗粒组，采用MCAO法建立脑缺血再灌注损伤模型大鼠，各组灌胃给药后，采用荧光实时定量聚合酶链反应(Real-time polymerase chain reaction，Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测脑组织PI3K/Akt信号通路上相关基因蛋白的表达水平。　　第二部分 栝楼桂枝颗粒调控PI3K/Akt信号通路对OGD/R神经元的保护作用作用　　实验一（栝楼桂枝颗粒对OGD/R神经元的保护作用）:分离培养原代海马神经元，建立OGD/R神经元模型，栝楼桂枝颗粒干预后，采用噻唑蓝(3-(4，5-dimethyl-2-thiazolyl)-2，5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT）法检测神经元细胞活性，采用Hoechst33342染色法检测神经元凋亡情况，同时采用免疫细胞化学染色法检测神经元特异性指标NSE、MAP-2的蛋白表达水平。桂枝颗粒显著上调NSE的蛋白表达水平(P＜0.01)。　　实验二（栝楼桂枝颗粒对对OGD/R神经元PI3K/Akt信号通路的影响）:Real-time PCR结果显示，与OGD/R组相比，栝楼桂枝颗粒组PI3K、Akt mRNA表达明显增加(P＜0.01)。同时Western Blot结果显示，与OGD/R组相比，栝楼桂枝颗粒组PDK1、PI3K、p-Akt则显著上调(P＜0.01)，各组中Akt蛋白表达差异无统计学意义。OGD/R前给予PI3K/Akt抑制剂LY294002后，去除了栝楼桂枝颗粒的干预效果。　　实验三（栝楼桂枝颗粒调控PI3K/Akt信号通路抑制神经元凋亡）:MTS法检测神经元活性、AnnexineⅤ/PI双染法检测神经元凋亡结果表明，OGD/R前给予PI3K/Akt抑制剂LY294002干预后，栝楼桂枝颗粒的提高神经元活性能力、抑制OGD/R诱导的神经元凋亡的作用被逆转。Caspase-3活性检测结果显示，与OGD/R组相比，栝楼桂枝颗粒组可显著降低Caspase-3活性，LY294002干预后，LY294002+栝楼桂枝颗粒组Caspase-3活性与OGD/R组比较无统计学差别(P＞0.05)。同时，Real-time PCR及Western Blot结果显示，栝楼桂枝颗粒干预保护后，与OGD/R组相比，Bcl-2、Bcl-xL、PI3K、Akt表达显著升高(P＜0.01);Bax、Bad、Caspase-3表达显著降低(P＜0.01)。OGD/R前给予PI3K/Akt抑制剂LY294002干预后，LY294002+栝楼桂枝颗粒组PI3K、Akt表达显著降低，与OGD/R组比较无显著性差异;LY294002+栝楼桂枝颗粒组Bcl-2、Bcl-xL表达增加，但与OGD/R组比较无显著性差异。　　结论:　　1.栝楼桂枝颗粒可改善I/R大鼠的神经行为学、提高抓握能力及肌力、减小脑梗死面积、改善脑组织病理变化、保护细胞结构，同时抑制神经元的凋亡，具有抗脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。　　2.栝楼桂枝颗粒可减轻OGD/R诱导的原代海马神经元的损伤，提高神经元细胞活力、抑制神经元凋亡，具有抗氧糖剥夺再灌注损伤的神经保护作用。　　3.栝楼桂枝颗粒可激活PI3K/Akt信号通路，上调PI3K、Akt、p-Akt、PDK1的表达水平。　　4.栝楼桂枝颗粒可上调Bcl-2、Bcl-xL等抗凋亡蛋白的表达水平，下调Bax、Caspase-3等促凋亡蛋白的表达水平，发挥其抑制神经元凋亡的保护作用。　　5.PI3K抑制剂LY294002可以显著阻断栝楼桂枝颗粒对神经元Akt mRNA及Akt、p-Akt蛋白表达，提示栝楼桂枝颗粒可激活PI3K/Akt信号通路发挥其抑制神经元凋亡的保护作用。