目的：　　1.观察呼吸道合胞病毒(RSV)感染后，人支气管上皮(HBE)细胞12h、24h、48h过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)和叉头框蛋白A2（FOXA2）mRNA、表皮生长因子（EGFR）mRNA表达和p-EGFR、EGFR蛋白比值、黏蛋白(MUC5AC)蛋白水平的变化。探讨 RSV感染后，气道黏液高分泌的调控作用。　　2.观察PPAR-γ激动剂罗格列酮和PPAR-γ拮抗剂(GW9662)及EGFR抑制剂（AG1478）干预后RSV感染HBE细胞PPAR-γ和FOXA2 mRNA表达、EGFR mRNA表达、p-EGFR/EGFR蛋白比值及MUC5AC蛋白水平的变化，探讨罗格列酮干预对RSV感染气道黏液高分泌的抑制作用及其机制。　　方法：　　1.将HBE细胞传代培养，待细胞生长至80％-90%左右时，于96孔板中配制100μL的HBE细胞悬液,培养板预培养24h(在37℃，5%CO2),向培养板加入10μL的10-50μmol/L的罗格列酮、GW9662及AG1478及0.1%DMSO。将培养板分别孵育12h、24h及48h,向每孔加入10μL CCK-8溶液。在培养箱内孵育1-4h后，用酶标仪测定450nm吸光度。　　2.建立RSV感染的体外HBE细胞模型，将HBE细胞传代培养，待细胞生长至80%-90%左右时，按每孔2*105传代于六孔板中，随机分成6组：A组（AG1478+RSV组）、B组（罗格列酮+RSV组）、C组（GW9662+RSV组）、D组（RSV组）、E组（0.1%DMSO+细胞组）、F组（细胞对照组）。RSV感染HBE细胞造模前2h，A组予AG1478（10μmol/L）预处理，B组予罗格列酮（10μmol/L）预处理，C组予GW9662（10μmol/L）预处理。A-D组以100TCID50 RSV感染吸附HBE细胞2h后加维持液继续培养，各组分别培养至12h、24h、48h，收获细胞及上清液进行检测。　　3.实时荧光定量RT-PCR检测上述3个不同时间点各组EGFR、PPAR-γ、FOXA2 mRNA表达情况，Western Blot方法检测p-EGFR及EGFR蛋白水平，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清液中MUC5AC蛋白。　　结果：　　1.病毒滴度测定：　　本实验RSV的TCID50为10-4.4/50μl，病毒攻击量为100TCID50。即10-2.4/50μl。　　2.罗格列酮、GW9662、AG1478及0.1%DMSO的细胞毒性：　　10μmol/L罗格列酮、10μmol/L GW9662和10μmol/L AG1478及0.1%DMSO处理后三个时间点（12h、24h、48h）HBE细胞存活率分别99.0%、98.8%、98.0%；99.6%、98.6%、98.2%；100.2%、98.6%、98.2%,和99.6%、98.8%、98.1%与细胞对照组相比差异无统计学意义（均P＞0.05），表明上述浓度的药物对HBE细胞无毒性作用。　　3. RSV感染及罗格列酮、GW9662、AG1478干预后PPARγmRNA表达变化：　　E、F组PPARγ仅少量表达，E组与F组相比，同一时间点PPARγmRNA表达量相近，差异无统计学意义，提示0.1%的DMSO对PPARγmRNA表达量无影响。与F组相比，A组、B组、D组PPARγmRNA表达量均有所增加（均P＜0.05），且随时间增加。A组、B组表达量逐渐增加，于48h达高峰，但D组表达量逐渐减少；C组表达量最少。B、C、D组差异有统计学意义（均P＜0.05）；三个时间点B组表达量均明显高于D组，差异有显著统计学意义（P＜0.05）。　　4. RSV感染及罗格列酮、GW9662、AG1478干预后EGFR mRNA表达变化：　　E、F组EGFR mRNA表达量最少，E组与F组相比，同一时间点表达量相近，差异无统计学意义，与F组相比，三个时间点的A组、B组、C组、D组表达量均有增加（均P＜0.05），且随时间增加，48h达到最高；三个时间点均以D组表达量最高；与D组相比，A组、B组EGFR mRNA表达量明显降低（均P＜0.05）。　　5.RSV感染及罗格列酮、GW9662、AG1478干预后FOXA2 mRNA表达变化：　　E、F组FOXA2呈高表达，E组与F组相比，同一时间点表达量相近，差异无统计学意义，与F组相比，三个时间点A组、B组、C组、D组表达量均有降低，随时间逐渐升高，其中D组表达量最低（均P＜0.05）。与D组相比，A组、B组的表达量明显升高（均P＜0.05）。　　6.RSV感染及AG1478、罗格列酮、GW9662干预后MUC5AC蛋白的表达变化：　　E、F组表达量最少，E组与F组相比，同一时间点表达量相近，差异无统计学意义；与F组相比，三个时间点A组、B组、C组、D组表达量均明显增加（均P＜0.05），且随时间增加而增加，在48h达高峰，其中D组表达量最高；与D组相比，三个时间点上A组、B组表达量均有降低（除12h的A组P＞0.05外，均P＜0.05）；相较于A组，B组表达量降低更明显（P＜0.05）。　　7. RSV感染及AG1478、罗格列酮、GW9662干预后p-EGFR/EGFR蛋白比值变化：　　E、F组比值最低，E组与F组相比，同一时间点差异无统计学意义；与F组相比，三个时间点的A组、B组、C组、D组比值均明显增加（均P＜0.05），且随时间增加而增加，在48h达到最高，其中D组比值最高；与D组相比，A组、B组蛋白量比值均明显降低（均P＜0.05）。　　结论：　　1. RSV感染后MUC5AC蛋白表达增加，表明RSV感染可引起气道黏液高分泌；同时PPAR-γ及EGFR表达增加、FOXA2表达减少，表明PPAR-γ、EGFR-FOXA2信号通路参与RSV感染后气道黏液高分泌过程。　　2. EGFR抑制剂干预后，可明显降低RSV感染后p-EGFR/ EGFR的蛋白比值及MUC5AC蛋白水平，FOXA2 mRNA的表达增加。证实EGFR通过抑制FOXA2的表达，参与RSV感染气道黏液高分泌过程。而EGFR抑制剂可上调FOXA2基因的表达，从而起到抑制气道黏液高分泌的作用。　　3.罗格列酮干预可促使RSV感染后PPAR-γmRNA表达增加，同时抑制EGFR mRNA表达和p-EGFR蛋白水平的升高，增加FOXA2 mRNA表达，从而抑制MUC5AC蛋白水平的增加；而使用PPAR-γ拮抗剂可逆转罗格列酮的上述作用，证实罗格列酮通过EGFR-FOXA2信号通路发挥抑制气道黏液高分泌作用。