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背景:肾小管间质纤维化(renal tubuleinterstitial fibrosis,RIF)是各种原因引起的慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)的共同通路和主要病理特征,肾间质纤维化是由于细胞外基质(extracelluar matirx,ECM)合成增加和降解减少的综合结果。肌成纤维细胞(myofibroblast, MyoF)是肾间质中产生ECM的主要细胞。最新研究认为,肾小管上皮细胞在病理刺激下可发生上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(epithelial to mesenchymal transdifferentiation, EMT),丧失原有的细胞表型特征,表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),呈现 MyoF 的特征表型,成为肾间质MyoF的主要来源。转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是TEMT的主要诱导因子,可单独或通过其致肾纤维化作用的下游因子促使 TEMT的发生。 目的:本实验研究益肾化瘀方对 TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞发生转分化的作用,以及对α-SMA、TGF-β1和纤维化抑制性因子Smad7表达的影响,探讨益肾化瘀方对肾间质纤维化防治作用的可能机制,为临床上应用益肾化瘀方防治肾间质纤维化提供理论依据。 方法:将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)以缬沙坦(代文)为阳性对照,分为:①正常对照组;②TGF-β1诱导组;③TGF-β1+益肾化瘀方低剂量组;④TGF-β1+益肾化瘀方中剂量组;⑤TGF-β1+益肾化瘀方高剂量组;⑥TGF-β1+缬沙坦组。培养 48h后取出,应用实时荧光定量 PCR(realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR)技术和细胞免疫化学技术检测细胞α-SMA、TGF-β1的mRNA及Smad7蛋白表达。每组后续相关实验重复三次。 结果:①与正常对照组相比,TGF-β1刺激组细胞从铺路石样上皮细胞向梭形肌成纤维细胞转变,免疫细胞化学染色可见Samd7染色阳性细胞显著减少;益肾化瘀方组细胞形态变化不显著,益肾化瘀方大剂量组上述染色阳性细胞数量与正常对照组差别不明显,代文组细胞变化与益肾化瘀方大剂量组相似。②与正常对照组相比,益肾化瘀方高剂量组α-SMA、 TGF-β1mRNA及Smad7蛋白的表达水平无显著性差异(p>0.05);益肾化瘀方低、中、高剂量均能抑制TGF-β1诱导的TGF-β1、α-SMAmRNA 表达,上调 Smad7 蛋白的表达,且呈剂量依赖性。益肾化瘀方高剂量组TGF-β1、α-SMAmRNA的表达水平显著低于TGF-β1刺激组(p<0.05),益肾化瘀方高剂量组TGF-β1、α-SMAmRNA表达与缬沙坦组比较无显著性差异(p>0.05)。③相各治疗组TGF-β1、α-SMAmRNA及Smad7蛋白的表达与TGF-β1刺激组差异显著(p﹤0.05);且其抗 RIF 作用与中药的剂量呈正相关;缬沙坦组细胞变化与益肾化瘀方高剂量组相似。 结论:①益肾化瘀方对 TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞 TGF-β1和α-SMA的高度表达具有一定的抑制作用,且呈明显的剂量依赖关系,大剂量益肾化瘀方抑制 TGF-β1和α-SMA 表达的效应与缬沙坦相似;②益肾化瘀方可以对抗TGF-β1诱导的Samd7降低;③由此推断,益肾化瘀方的抗纤维化作用可能通过降低TGF-β1和α-SMA的表达,上调Smad7的表达而实现。