目的:构建携带人GITR基因胞外段真核表达质粒pDisplay-hGITRaa1-165构建人hGITRaa1-165-IgG1 Fc段融合蛋白的真核表达载体hGITRaa1-165-IgG1 Fc/pcDNA3.1(+)，并在COS-7细胞中进行蛋白表达。 方法:(1)以pGEMT-GITR质粒为模板，进行PCR反应，获得含人GITR胞外段的基因。目的基因经BglⅡ和PstⅠ双酶切，1％琼脂糖电泳后切胶回收并与同样处理的真核表达载体pDisplay连接，转化大肠埃希菌DH5a，以构建pDisplay-hGITRaa1-165真核表达质粒，双酶切及序列测定鉴定阳性重组子。制备真核表达质粒pDisplay-hGITRaa1-165，通过脂质体法转染COS-7细胞，并按照不同时间收集细胞上清。Western blot法检测pDisplay-hGITRaa1-165融合蛋白的表达。 (2)以PCR方法从阳性TA克隆中获得hGITR胞外段(hGITRaa1-165)基因，连接至hlgGlFc-pcDNA3.1(+)质粒(含人IgG1-Fc基因)，转化DH5a宿主菌，选择阳性株，抽提质粒，进行Hind Ⅲ和BamH Ⅰ双酶切及测序鉴定。以同样方法构建对照质粒eGFP-IgG1 Fc/pcDNA3.1(+)。制备真核表达重组质粒，脂质体法转染COS-7细胞，设定不同的转染条件，并按照不同时间收集细胞上清。Western blot法检测hGITRaa1-165-IgG1 Fc/pcDNA3.1(+)融合蛋白的表达。将hGITRaa1-165-IgG1 Fc融合蛋白分别与THP-1，HUEVC细胞共培养后，在不同时间段进行细胞计数。 结果:(1)通过PCR获得大小为hGITRaa1-165基因片段，构建pDisplay-hGITRaa1-165真核表达质粒，经PCR及双酶切鉴定均可见目的条带，测序结果显示100％正确。Western blot法检测到pDisplay-hGITRaa1-165蛋白在COS-7细胞中的表达，蛋白分子量大约为15KD。 (2)成功构建hGITRaa1-165-IgG1 Fc/pcDNA3.1(+)真核表达质粒，测序结果通过Pubmed Blast发现与GenBank中的序列一致。根据对照质粒eGFP-IgG1Fc/pcDNA3.1(+)转染COS-7细胞选择最佳转染条件，DNA质量/转染试剂梭华-SofastTM体积为1：3，收集蛋白最佳时间为48h。通过Western blot法检测到转染细胞上清中存在融合蛋白。初步结果显示hGITRaa1-165-IgG1 Fc/pcDNA3.1(+)融合蛋白能促进THP-1细胞的生长。 结论:成功构建pDisplay-hGITRaa1-165表达载体及hGITRaa1-165-IgG1 Fc/pcDNA3.1(+)载体，并在COS-7细胞中表达目的蛋白，为GITR的生物学功能研究奠定了基础。