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目的:
本研究拟通过分析生脉注射液联合吉西他滨、顺铂、紫杉醇及表阿霉素等不同肿瘤化疗药物对肺癌(A549)、胃癌(SGC-7901)、乳腺癌(MCF-7)及肝癌(HepG-2)等不同肿瘤细胞的增敏作用,综合比较生脉注射液对不同肿瘤细胞的减毒增敏效果,并对其增敏作用的分子机制及活性成分进行初步的研究,为临床应用打下基础。
方法:
1、通过细胞增殖抑制试验MTT比色法测定较低体积分数生脉注射液结合不同临床典型化疗药物作用于不同肿瘤细胞后对于化疗药物的增效作用;通过流式细胞法测定化疗药物在结合生脉注射液后对细胞周期和细胞凋亡率的影响。采用RT-PCR方法检测生脉注射液对于MDR1基因表达的影响。
2、再次通过细胞增殖抑制试验MTT比色法测定生脉注射液中红参及五味子的10种已知成分标准品结合表阿霉素作用于肝癌细胞HepG-2的化疗增敏效果,进而明确其主要活性成分。
结果:
1、在较低体积分数下,生脉注射液联合吉西他滨、顺铂、紫杉醇和表阿霉素作用于不同肿瘤细胞A549、SGC-7901、MCF-7和HepG-2后对不同化疗药物均具有增敏效果,其中生脉注射液联合表阿霉素增敏效果最为显著,生脉注射液使肝癌细胞HepG-2对表阿霉素的敏感性提高了16倍。通过MTT试验选出最敏感组合:生脉注射液与表阿霉素结合作用于肝癌细胞HepG-2,之后采用此组合进行细胞周期与细胞凋亡实验。通过流式细胞法测定的细胞周期与凋亡实验结果显示,低体积分数的生脉注射液不影响肿瘤细胞HepG-2的周期和凋亡,但与表阿霉素联用后,能够明显增强表阿霉素对HepG-2细胞周期和凋亡的作用效果。RT-PCR的结果显示,与对照组相比较,单用生脉注射液可降低MDR1的基因表达,单用表阿霉素组能够提高MDR1的表达,但不具统计学意义,两者联合用药组则是显著降低了MDR1基因的表达。由此可知生脉注射液能够降低MDR1基因的转录水平,进而下调外排泵蛋白P-gp的表达,进而提高表阿霉素在细胞内的作用浓度,提高表阿霉素的作用效果。
2、再次通过细胞增殖抑制试验MTT法测定的生脉注射液活性成分实验结果显示,当只用红参中的主要成分人参皂苷(1~8)作为实验药物时,增敏作用不到生脉注射液增敏效果的一半,而当添加了五味子中主要成分五味子乙素(9)及五味子醇甲(10)后增敏效果大大提升,几乎与生脉注射液的增敏效果一致,故可知,红参中主要成分人参皂苷(1~8),及五味子主要成分中五味子乙素(9)及醇甲(10)为化疗增效作用的主要活性成分,而其中9和10的作用效果尤为明显。
结论:
生脉注射液联合不同化疗药物对多种肿瘤细胞均有明显的增效作用,其作用机制与降低MDR1基因转录水平及其编码的具有药物外排作用的P-gp蛋白的表达有关。其活性由人参皂苷及五味子乙素、醇甲共同参与,其中五味子成分起主要作用。