木霉菌(Trichoderma spp)能分泌产生纤维素酶、木聚糖酶和木质素酶,并能产生和积累微生物油脂,因此利用木霉能够分解木质纤维素类的作物秸秆,并利用分解木质纤维素产生的单糖、合成和积累油脂。本文对能够利用天然木质纤维素合成和积累微生物油脂的木霉菌株进行了筛选、发酵条件的优化以及木霉油脂成分的分析。1.对培养在C/N为40的固体培养基上(g/L：葡萄糖20,硫酸铵0.3,酵母膏0.25,尿素0.25,硫酸亚铁0.01,硫酸锰0.001,硫酸锌0.001,硫酸镁0.5,琼脂12,pH自然)的52株木霉菌株进行尼罗红染色、菌丝油脂提取和纤维素酶、木质素降解酶活力测定,确定哈茨木霉Q2-37菌株和橘绿木霉ACCC30152菌株为利用木质纤维素产油的最优菌株。哈茨木霉Q2-37菌株干菌丝中的油脂含量为20.5%±0.36%,以玉米秸秆粉为唯一碳源的培养基质上培养Q2-37,每利用100g玉米秸秆粉可以产生1.188g油脂。橘绿木霉ACCC30152干菌丝油脂含量可达22.7%,固体发酵该菌株每消耗100g玉米秸秆粉能够产生1.0克油脂。2.以利用木质纤维素产油的最优菌株—哈茨木霉Q2-37为试验对象,研究了影响哈茨木霉Q2-37固体发酵条件下油脂产量的培养温度、pH、培养基质类型、培养基质配比、氮源浓度、氮源种类、培养基含水量、接种量8个因素。哈茨木霉Q2-37固态发酵产油脂的最佳条件是：麦麸和玉米秸秆粉按照9：1的比例配制基本固体培养基,添加1.25%的硝酸钠和2.8%酵母膏,再加入0.2%的微量元素营养液(g/L：硫酸亚铁10,氯化钴1,氯化锌1,硫酸锰1,硫酸铜10)和1.5倍于培养基基质的水(以上成分比例均为占培养基质干重的比例),接种量为15%2d龄液种子(v/w)。在此基础上,pH6,30℃,发酵8d,每利用100g干物料,油脂产量可以达到3.73g。3.本课题的主要目的是筛选能够利用玉米秸秆等富含木质纤维素产生油脂的木霉菌株,因此在上一步确定了最佳的固体发酵条件后,我们用玉米秸秆粉作为唯一的培养基质,其他培养条件不变,比较了在最佳培养条件下哈茨木霉Q2-37利用最佳培养基的产油脂量和利用玉米秸秆粉的产油脂量,证明了哈茨木霉Q2-37利用玉米秸秆等富含木质纤维素产生油脂的研究潜力。固态发酵哈茨木霉Q2-37菌株,结果为每利用100g玉米秸秆粉,油脂产量为2.77g,与优化前的1.19g相比提高了一倍多,并且与利用以麦麸为主的培养基质相比(每利用100g麦麸和玉米秸秆粉按照9：1的比例配制基本固体培养基产生3.73g油脂),所产生的油脂量较为接近,证明该菌株在实验最佳培养条件下利用富含木质纤维素的玉米秸秆产油脂具有很大的应用潜力。4.在最佳培养条件下固体发酵哈茨木霉(Trichoderma harzianum)Q2-37菌株,以酸热法提取培养物中的总脂,利用气相色谱一质谱联用仪分析提取物中的化学成分,应用峰面积归一化法确定各成分的相对含量。经检测可知,提取物中共有23种脂肪酸成分,其中不饱和脂肪酸有8种,相对含量为50.26%,多不饱和脂肪酸2种,相对含量13.19%,饱和脂肪酸13种,相对含量为48.75%；另外用二氯甲烷法对培养物中的烷烃物质进行了提取,用气相色谱一质谱联用仪对提取物进行了定性分析,在该提取物中共检测到14种烷烃类物质,其中9种为C9-C18的链烃,与化石柴油的主要成分相同。该结果表明,利用哈茨木霉通过固体发酵木质纤维素产生脂肪酸及烷烃物质具有潜在的研究和应用价值。