不耐热肠毒素(Heatlabileenterotoxin，LT)是肠产毒性大肠杆菌(EnterotoxigenicE.coli，ETEC)分泌的一种热不稳定性肠毒素。它是由A、B两种亚单位组成的AB5型杂六聚体蛋白，是目前人们发现的最强有力的粘膜免疫原和粘膜免疫佐剂之一。然而，已有的研究发现，不论是LTB的N端还是C端融合抗原，虽然能够形成正常的五聚体，且具有受体的亲合活性。但形成五聚体的效率并与细胞表面受体结合能力以及五聚体化学稳定性，都会受到很大的影响，从而降低了其作为抗原传输载体的效能。 动物免疫实验证实，LT全毒素分子明显比B亚单位五聚体有更强的免疫原性。人们研究了A、B亚基对佐剂作用的影响。发现单独的LTB与靶抗原同时口服后，佐剂作用不明显，而微量全毒素LT同抗原共同口服后，表现出很强的佐剂作用。 当前，对减毒LT在烟草植物叶绿体中的表达已有研究，但还未见大肠杆菌肠毒素LT在植物胞质中表达的报道。本实验研究的目的是将从K88ac+强致病菌株中克隆的LTA、LTB基因，构建成两种双价植物高效表达载体，其中一种是将LTA、LTB基因单独构建到两个表达框。另一种是利用三引物PCR法(TP-PCR)技术，将拟南芥(Arabidopsis)泛素基因与烟草病程相关蛋白PRla基因的信号肽序列体外重组；并将重组的融合基因分别定向克隆到两目的基因前。有实验证实此融合蛋白的引入可增强外源基因在植物体内的表达。然后利用植物表达载体成功构建了带有此融合基因不耐热肠毒素A、B亚单位基因双价植物表达载体pCUPAB。最终将重组子转化烟草，经卡那霉素(Kan)多重筛选，获得抗性植株。对抗性植株提取DNA进行PCR分析，90％抗性植株均呈阳性。随机选取几株生长良好的PCR检测为阳性的植株进行Westerndot检测和蛋白表达分析，以验证六聚体和五聚体的整合效果。结果在进行Westerndot检测时只有少数样品出现杂交信号。 本实验结果表明LT全毒素在植物胞质中能正确组装。此研究为进一步构建带有保护性抗原类全毒素嵌合植物疫苗奠定基础。