【摘 要】
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动物精液冷冻保存技术在种质资源保护和家畜繁殖中发挥重要作用,但是冷冻过程中过量的ROS和抗氧化系统的破坏使猪精子容易受到氧化应激,降低精子利用率。Mito Q作为一种新型线粒体靶向抗氧化剂,可有效清除ROS,降低氧化应激反应。本研究在猪精液冷冻稀释液中添加0μM、5μM、10μM、20μM和40μM的Mito Q,冷冻-解冻后检测精子运动能力、质膜完整性、DNA完整性、线粒体活性、顶体完整性、精子
【基金项目】
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山西省畜禽良种联合攻关工程项目； 三晋学者支持计划专项经费资助（2016,2017）； 山西农业大学2022年度“特”“优”农业高质量发展科技支撑工程建设项目； 山西省现代农业猪产业技术体系项目；
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动物精液冷冻保存技术在种质资源保护和家畜繁殖中发挥重要作用,但是冷冻过程中过量的ROS和抗氧化系统的破坏使猪精子容易受到氧化应激,降低精子利用率。Mito Q作为一种新型线粒体靶向抗氧化剂,可有效清除ROS,降低氧化应激反应。本研究在猪精液冷冻稀释液中添加0μM、5μM、10μM、20μM和40μM的Mito Q,冷冻-解冻后检测精子运动能力、质膜完整性、DNA完整性、线粒体活性、顶体完整性、精子抗氧化相关指标,并且对线粒体蛋白进行蛋白组学分析,研究其对猪冷冻精液品质、精子能量代谢相关蛋白表达以及线粒体的影响,为Mito Q在猪精液冷冻稀释液中的应用提供科学依据。主要结果如下:1.冷冻-解冻后10μM处理组的精子活力、活率、运动能力、质膜和DNA完整率、线粒体和顶体完整性均显著高于对照组和其他处理组（P＜0.05）;10μM处理组中MDA含量显著低于对照组和其他处理组（P＜0.05）;添加Mito Q对解冻后精子内SOD的活性无显著性影响（P＞0.05）;10μM处理组T-AOC及GSH-Px活性显著高于对照组和其他处理组（P＜0.05）。2.对各组冷冻精液进行Western blotting,检测冷冻-解冻后精子能量代谢相关蛋白Glut 3和Glut 8的表达。结果表明:10μM处理组解冻后精子的Glut 3和Glut 8蛋白表达量显著高于对照组和其他处理组（P＜0.05）。3.对10μM处理组和对照组精子线粒体蛋白质进行蛋白质组分析,结果表明:10μM处理组和对照组之间,具有统计学差异的蛋白质数量为189个,其中表达量上调（FC＞1.2）的有98个,表达量下调（FC＜0.83）的有91个。10μM处理组表达量显著下调的线粒体差异蛋白主要集中在呼吸链上,降低过量能量代谢,清除ROS,保护精子免受氧化应激,抑制细胞色素c的释放,减少细胞凋亡,维持细胞活力。综上所述,在猪精液冷冻稀释液中添加适宜浓度Mito Q（10μM）,可有效清除ROS,减少过度能量代谢,降低细胞所受氧化损伤,保护精子细胞结构,包括质膜、DNA、顶体及线粒体结构完整,最终抑制细胞凋亡,维持细胞活力,提高精子冻后质量。
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