大豆抵抗SMV侵染过程中H2O2的时空变化特征及功能研究

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实验室前期工作证明,胼胝质在胞间联丝上沉积是大豆抵抗大豆花叶病毒(SMV)在胞间转运的关键因素,同时证明了NO在SMV侵染大豆诱发的胼胝质沉积过程中发挥重要的信号转导作用。在上述研究的基础上,本试验利用大豆品种“冀豆7”号分别与大豆花叶病毒株系N3及SC-8组成不亲和组合及亲和组合,探讨了大豆在抵抗SMV侵染过程中,H2O2的时空分布、H2O2在胼胝质积累过程中的作用及在介导胼胝质沉积过程中H2O2与NO信号之间的上下游关系。试验所获结果如下:  1、分别利用DAB和CeCl3特异性标记H2O2,通过光学显微镜和透射电镜观察,发现两种标记方法均显示在不亲和组合坏死斑产生前后寄主细胞有H2O2产生。坏死斑产生之前随着时间的延长,H2O2的积累量处于不断增加的状态,但坏死斑产生后,始终被限制在坏死斑周围。电镜观察显示H202主要分布在寄主的细胞壁及质膜部位。随后通过预注射NADPH氧化酶抑制剂咪唑,发现H2O2的产生明显减少,说明H2O2的产生可能主要依赖于NADPH氧化酶。而亲和组合中H2O2的产生一直较少,只有前期(0-24h)以及出现坏死斑后(96h开始产生)有着少量的H2O2产生。  2、通过实时定量PCR对H2O2代谢相关基因进行表达分析,结果显示在不亲和组合中,SOD、NOX被诱导表达,而CAT的表达被抑制,这可能是导致H2O2清除与产生系统失衡,并使得H2O2在互作体系中大量积累的主要原因。  3、在不亲和组合中通过预注射咪唑抑制H2O2的产生发现胼胝质的产生明显减少;在处理叶片的上位叶出现大豆花叶病毒的病斑,并且在上位叶片检测到了病毒的CP产物。说明在大豆与SMV组成的不亲和互作体系中,H2O2可能介导了胼胝质的诱发过程。  4、在不亲和组合中预注射咪唑后,利用NO特异性荧光探针DAF-FMDA标记NO,并没有影响NO的产生。而预注射NO清除剂c-PTIO后,H2O2的产生明显受到了抑制。初步证明在大豆抗SMV过程中H2O2可能位于NO下游起作用。
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