血液是人体的重要组成部分,血型由血细胞表面的抗原决定。自发现血液有不同类型以来,鉴定血型的方法也在不断发展,从依赖血清学方法到与分子生物学手段结合判定,因此也有越来越多的血型系统和抗原被发现,但是血型的多态性起源至今尚未有明确定论。目前主要有两种假说。一种是“血型饮食假说”,但是该假说缺乏支持依据;另一种是流行病形成假说。Rh血型系统在临床医学中占有重要的地位,并且是最复杂的血型系统。其中,由于RHD基因表达的Rh D抗原具有最强的免疫原性,所以红细胞上是否具有D抗原被作为判断Rh D阳性或阴性的标准。Rh阴性血在中国人群中占比极低,导致该类血型的血液需求难以满足,如果能实现“万能血”,可以极大地缓解对稀有血型血液的需求,目前已经有研究者使用酶降解等手段进行了尝试。近年来基因编辑技术由于CRISPR系统的发现而逐渐被广泛使用,本研究通过对外周血中的造血干细胞进行基因编辑,希望达到将RH阳性血改造为RH阴性血的目的。然后通过增殖编辑过的造血干细胞,并将它诱导成红细胞,缓解RHD阴性血供血紧张的现状,使血液的改造向“万能血”更进一步。本研究使用流式细胞术成功从外周血中提取了以CD34和CD90为标记物的造血干细胞,并实现了体外培养;用PX458质粒构建了CRISPR-Cas9介导的靶向基因编辑重组质粒;以293细胞为模型,进行了转染,找到了具有编辑效率的g RNA;形成了一套相对可行的造血干细胞基因编辑修饰技术,初步探讨了基因编辑方法对Rh血型系统进行改造的可行性。